5种商品化支原体检测试剂盒的质量评价

摘要

泌尿生殖道支原体感染与许多疾病有关，临床检测支原体的方法有多种，但培养法是临床中最常应用的一种方法。随着抗菌药物的滥用或不合理应用的增多，支原体耐药情况越来越严重，迫切需要能正确反映支原体临床耐药情况的体外药敏试验来指导临床用药。 目前，市场上有多种支原体的商品化试剂盒，集培养、鉴定和体外药敏等功能于一体，操作简单，使用方便。但由于支原体生长条件苛刻，对支原体培养基要求较高，国内外尚无支原体试剂盒的质控标准，各生产厂家出品的试剂盒质量参差不齐，因此有必要对进行支原体检测试剂盒的质量进行评价。 本试验通过应用5种常用的不同生产厂家的支原体检测试剂盒(M—法国梅里埃公司、K—江门市凯林贸易有限公司、L—珠海丽珠试剂有限公司、H—珠海黑马试剂有限公司和A—上海奥康生物医药公司提供)对解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)的标准株和临床株进行最低菌液稀释浓度检测、临床应用效果(包括灵敏度、特异度等方面指标)及重复性进行评价，以比较不同试剂盒的质量差异。应用解脲脲原体标准株第4和第14血清型作为培养菌株，以10倍稀释法将菌液稀释成不同的菌液浓度，分别接种于5种商品化支原体检测试剂盒的液体培养基中，观察不同菌液浓度的Uu在5种商品化培养基中的生长情况，比较这5种培养基对Uu检测的最低稀释浓度；并将液体培养基中阳性标本转种到固体鉴别培养基，观察菌落生长情况，以比较其特异性。同时应用这5种支原体检测试剂盒，对符合非淋菌性尿道炎或粘液脓性宫颈炎临床诊断标准的33例患者的尿道或宫颈拭子标本进行分离培养、鉴定，以比较这5种培养基的灵敏度和特异度差异。 记录Uu第4和第14血清型标准株和上述33例患者分离培养出的22株Uu临床株在这5种支原体检测试剂盒药敏试剂条的药敏情况；同时以微量肉汤稀释法对这2株Uu标准株和22株Uu临床株进行强力霉素、交沙霉素、氧氟沙星和阿齐霉素体外药敏试验，测定最低抑菌浓度值(minimal inhibitory concentration，MIC)；比较这5种商品化Uu试剂盒药敏情况与MIC值的差异。 通过这5种Uu商品化试剂盒的培养基对Uu标准菌株第4和14血清型检验，结果表明：①试剂盒培养基Uu4和Uu14检测的最低浓度比较：M、K、L、H和A试剂盒的能检测到的Uu4和Uu14最低菌液浓度分别为10-8、10-8、10-7、10-7、10-7和10-8、10-8、10-7、10-6、10-6；提示这5种培养基检测Uu的浓度由低到高依次为：M、K、L、H、A。②特异度比较：这5种Uu商品化试剂盒的培养基的特异度都为100％。 这5种商品化培养基对临床标本的检测结果：一致度比较，M、K、L和H试剂盒与固体培养基一致度满意，kappa＞0.75；灵敏度比较，M、K、L和H培养基的灵敏度都大于90％；特异度：M、K、A试剂盒都达到100％。重复率比较：M和K为100％(10/10)，L和H为90％(9/10)，A培养基的重复率为80％(8/10)。 应用微量肉汤稀释法测定4种常用抗菌药物(强力霉素、交沙霉素、氧氟沙星和阿齐霉素)对22株Uu临床菌株的MIC值，其范围分别为：强力霉素0.06～16pg/ml，交沙霉素0.06～16μg/ml，氧氟沙星0.25～128μg/ml，阿齐霉素0.25～32μg/ml；参照CLSI 2006年第16版耐药判断标准，制定4种抗菌药物对Uu耐药标准如下：交沙霉素、强力环素MIC值≧8μg/ml为耐药菌株，氧氟沙星、阿齐霉素MIC值≧4μg/ml为耐药菌株，由此判定，强力霉素和交沙霉素耐药率最低(9％)，其次为阿齐霉素(13.6％)，耐药率最高的为氧氟沙星(36.4％)；提示治疗本地区Uu感染氧氟沙星、阿齐霉素不能作为临床经验用药的推荐用药，临床治疗Uu感染时应根据体外药敏试验结果选择药物。5种试剂盒药敏试剂条只能根据药敏孔的颜色变化来判断药物对Uu的敏感性，如果药敏孔颜色变红，则表示相应的药物对Uu敏感；但不能给出确切的MIC值。以肉汤稀释法作为标准方法，将这4种药物对上述22株临床菌株通过肉汤稀释法测得的MIC值结果作为标准，分别与这5种药敏试剂条体外检测这4种药物对这22株Uu临床菌株的敏感性相比较，强力霉素、交沙霉素、阿齐霉素与标准方法一致性最满意的试剂盒分别是：L和K、M、M和L；氧氟沙星M试剂盒和标准法一致性最满意，而A试剂盒与金标准的检测结果一致性较差(kappa=0.027)。 从本实验可初步得出如下结论：M、K试剂盒检测效果最佳，H和L试剂盒检测效果较好；A试剂盒的药敏试剂条氧氟沙星检测的药敏试验结果不可靠。

目录

文摘

英文文摘

声明

引 言

第一章研究背景

第二章材料与方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

参考文献

附 录

致 谢