猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒试制及与商品化试剂盒的比较

摘要

猪圆环病毒(Porcine Circovirus，PCV)是一种最小的动物病毒，有两种血清型，PCV2对猪体有致病性，PCV1却没有。猪群感染PCV2能引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS）和猪皮炎肾病综合征（Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome，PDNS）等多种疾病及免疫抑制。PCV2的感染在猪群中普遍存在，严重影响养猪业的正常健康发展。
　　猪圆环病毒2型的Cap蛋白为PCV2的主要结构蛋白，包含多个B细胞表位与中和表位，具有良好的抗原性，可以诱导猪体产生保护性免疫应答。PCV2抗体检测技术有ELISA、IPMA和IFA等，其中ELISA抗体检测方法操作方法简单，可同时进行大量血清样品检测。目前商品化的PCV2 ELISA抗体检测试剂盒均是间接ELISA检测方法，对抗原纯度要求较高，容易产生假阳性。本实验室以5H7酶标鼠单抗为基础，建立了PCV2 Cap蛋白的阻断ELISA抗体检测方法，特异性更好，能更准确的反应血清抗体水平，具有重要研究开发价值。
　　本研究基于PCV2 Cap蛋白的阻断ELISA抗体检测试剂盒制造和检验规程草案，在江苏南农高科技股份有限公司GMP车间制备了PCV2 CapC重组蛋白、酶标单抗、PCV2阴阳性标准血清基础上，制备了5批猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒，进行了性状检验、无菌检验、敏感性检验和特异性检验，并且与国内的瑞普（保定）生物药业有限公司生产的猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒和韩国金诺公司生产的PCV2 ELISA抗体检测试剂盒进行符合率比较试验。结果表明，制备的5批猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒的性状检验、无菌检验、敏感性检验和特异性检验全部合格。采集了江苏省5个猪场采集598份猪血清用来与国内外的两种试剂盒进行符合率试验，证明该试剂盒与金诺商品试剂盒和瑞普试剂盒符合率分别为93.6％～94.5％和81.8％～84.5％，证明该试剂盒可用于猪群PCV2抗体检测。

目录

声明

摘要

第一章 猪圆环病毒病的研究进展

1 病原概述

2 流行病学与临床诊断

2．1 流行病学

2．2 临床诊断和病理学观察

3 病原学检测

3．1 病毒的分离和鉴定

3．2 间接免疫荧光试验(IFA)

3．3 多聚酶链式反应(PCR)

3．4 原位杂交(ISH)

3．5 免疫组织化学试验(IHC)

3．6 酶联免疫吸附试验(ELISA)

4 猪圆环病毒疫苗的研究

4．1 灭活疫苗

4．2 弱毒疫苗

4．3 亚单位疫苗

4．4 DNA疫苗

4．5 活载体疫苗

参考文献

第二章 猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒中间试验

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果

2．1 菌种鉴定

2．2 细胞种子的鉴定

2．3 试剂盒组成成分的制备与中间检验

2．4 试剂盒的组装与成品检验

3 讨论

参考文献

第三章 猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒与商品化试剂盒的比较

1 材料与方法

1．1 主要试剂和材料

1．2 临床样品准备

2 方法

2．1 PCV2阻断ELISA抗体检测试剂盒操作方法

2．2 商品化PCV2 ELISA抗体试剂盒操作步骤

3 结果

3．1 与同类商品化试剂盒的符合率试验结果

3．2 临床血清样品检测

4 讨论

参考文献

全文总结

致谢