定量检测端粒酶逆转录酶mRNA在肝癌中的表达水平及其对预后的影响

摘要

背景与目的 原发性肝癌(Primary liver cancer，PLC)是中国最常见的恶性肿瘤之一，在肿瘤死亡原因中占第2位。目前，手术切除仍然是肝癌首选的治疗手段，但是即使是根治性切除，其术后复发率仍很高，生存率仍较低。如何判断肝癌预后是目前亟需解决的问题。肝癌预后的判断在于判断肝癌的生物学特性。研究表明端粒酶与恶性肿瘤发生发展有密切关系。端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)是端粒酶合成的限速酶，其表达与端粒酶活性呈正相关。研究表明，端粒酶表达阳性的恶性肿瘤预后差。hTERTmRNA的检测方法较端粒酶活性检测方便且精确。目前在肝癌中定量检测hTERTmRNA的报道较少见，本研究采用荧光定量逆转录PCR技术结合Taqman MGB probe技术，利用绝对定量的方法研究肝癌及癌旁组织中hTERTmRNA的表达，探讨定量检测hTERT mRNA水平与肝癌术后复发与长期生存的关系。 方法： 选取中山大学肿瘤防治中心2002年1月～2003年12月间手术切除的术后病理确诊为肝细胞癌的30例病例的肝癌组织和癌旁组织，用实时荧光定量逆转录PCR技术结合Taqman MGB探针法定量检测其hTERTmRNA的表达水平，利用统计学分析其与肝癌术后复发与长期的关系。 结果： hTERTmRNA在肝癌和癌旁组织中均可探测到表达，hTERT mRNA在癌组织中表达的中位数为523(3.5～9220)copies/ug；在癌旁组织中表达的中位数为153(12.9～1760)copies/ug。hTERTmRNA在癌组织和癌旁组织中的配对检验具有显著差异，hTERTmRNA在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织的表达(z=-4.001，p<0.0001)；hTERTmRNA在肝癌组织和癌旁组织中的表达与性别、年龄、乙肝病毒感染、病理分级无明显相关性；hTERTmRNA在1年内复发的病例与1年内未复发的病例的肝癌组织的配对检验无统计学差异(z=-1.420，p=0.158)；hTERTmRNA在1年内复发的病例的癌旁组织中的表达比1年未复发的病例的癌旁组织中的表达高，且有明显统计学差异(z=-2,518，p=0.011)：3年生存的患者与死亡的患者间癌和癌旁hTERTmRNA的表达水平没有明显的统计学意义(p>0.05)。 结论： 荧光定量逆转录PCR法一种敏感有效的检测hTERTmRNA的方法；hTERTmRNA在肝癌组织中表达较癌旁组织中的表达明显高；hTERTmRNA在癌旁组织中的表达水平可能与术后早期复发相关；hTERTmRNA在癌以及癌旁组织中的表达水平与患者长期生存无关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词表

声明

第一章引言

第二章实验材料和方法

第三章结果

第四章讨论

第五章结论

第六章问题与展望

参考文献

附录

致谢