慢性再生障碍性贫血中医辩证分型与外周血端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平的相关性研究

摘要

目的:测定慢性再生障碍性贫血(Chronic aplastic anemia,CAA)患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达水平,以探讨CAA中医辨证分型与外周血单个核细胞hTERT mRNA的表达水平的相关性,进一步从分子水平探讨CAA的发病本质,寻找中西医结合切入点并试图寻求新的治疗思路。
　　方法:将30例CAA患者按照中医辨证分型标准进行辨证分组,肾阳虚型组10例、肾阴虚型组10例、肾阴阳两虚型组10例。运用实时荧光定量PCR的方法测定30例CAA患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达,并选取10例正常查体者作为对照组。观察CAA患者中医辨证分型与外周血单个核细胞hTERT mRNA的表达水平的关系;观察外周血单个核细胞hTERT mRNA的表达水平与CAA患者年龄、性别、三系减少程度的关系;观察中医辨证分型与CAA患者年龄、性别、三系减少的关系,并对结果进行统计学分析,以探讨其相关性。
　　结果:(1)肾阴虚型、肾阳虚型、肾阴阳两虚型CAA患者外周血单个核细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达水平,组间比较无显著性差异(P＞0.05);与正常对照组比较,肾阴阳两虚型CAA患者外周血单个核细胞hTERT mRNA的表达水平低,有显著性差异(P＜0.05)。
　　(2)CAA患者按年龄分组,>40岁组外周血单个核细胞hTERTmRNA的表达水平比CAA患者≤40岁组、正常对照>40岁组、正常对照≤40岁组低,均有显著性差异(P<0.05);CAA患者≤40岁组、正常对照>40岁组、正常对照≤40岁组hTERTmRNA的表达水平,组间比较均无显著性差异(P>0.05)。
　　(3)CAA患者外周血单个核细胞hTERTmRNA的表达水平男性组与女性组比较,无显著性差异(P>0.05)。
　　(4)CAA患者以血常规白细胞数2.5×10^9/L、血红蛋白65g/L、血小板数40×10^9/L各分为两组,外周血单个核细胞hTERTmRNA的表达水平,各自两组间比较均无显著性差异(P>0.05)。
　　(5)肾阴阳两虚型CAA患者年龄比肾阴虚型组、肾阳虚型组及正常对照组大,有显著性差异(P＜0.05);肾阴虚型、肾阳虚型及正常对照组的年龄,组间比较无显著性差异(P>0.05)。
　　(6)肾阴虚型、肾阳虚型、肾阴阳两虚型组CAA患者性别构成比与正常对照组比较,无显著性差异(P>0.05)。
　　(7)肾阴虚型、肾阳虚型及肾阴阳两虚型CAA患者外周血白细胞、血红蛋白、血小板数比较,均无显著性差异(P>0.05)。
　　结论:肾阴阳两虚型CAA患者外周血单个核细胞hTERT mRNA的表达水平降低;CAA患者中大于40岁患者的外周血单个核细胞hTERT mRNA的表达水平降低;表明外周血单个核细胞hTERT mRNA的表达水平降低,端粒酶活性减低,可能是中医肾阴阳两虚型和>40岁的CAA患者的分子生物学水平发病机制之一;肾阴阳两虚型组CAA患者具有年龄大的临床特征,证实中医学“人到中年,肾气自衰”的说法,并推测hTERT mRNA的表达水平降低,端粒酶活性下降,可能是中医“肾虚”的分子生物学表现之一。

目录

提要

ABSTRACT

引言

临床研究

一、研究对象

二、诊断标准

三、纳入标准与排除标准

（一）纳入标准

（二）排除标准

四、中医辨证分型标准

实验研究

一、实验材料

（一）主要仪器

（二）主要试剂及材料

（三）引物

（四）主要溶液的配制方法

二、试验标本的制备

（一）外周血单个核细胞的提取

（二）RNA 的提取方法

（三）总 RNA 的测定

三、一步法荧光定量 PCR 反应

四、统计方法

五、实验结果

（一）各中医证型组与正常对照组 hTERTmRNA 的表达水平及差异

（二）CAA 患者和正常对照＞40 岁组与≤40 岁组 hTERTmRNA 的表达水平及差异

（三）CAA 患者和正常对照者男性组与女性组 hTERTmRNA 的表达水平及差异

（四）CAA 患者按照血常规分组，各两组之间 hTERTmRNA 的表达水平及差异

（五）CAA 患者的中医辨证分型与患者临床特征的关系

讨论

一、中医学对再生障碍性贫血的认识

（一）中医学对血液生成的认识

（二）中医学关于再障病因病机的认识

（三）治则治法

二、现代医学对再障发病机制的认识

（一）免疫异常与 CAA 的发病

（二）细胞因子的造血调控作用

（三）基因异常与 CAA 发病

三、端粒、端粒酶基因（TERC）与 CAA 的发病

四、中医“肾虚”与端粒、端粒酶及衰老的关系

五、实验结果及分析

结语

参考文献

综述

参考文献

附录

致谢

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