青蒿琥酯抑制GH3垂体瘤细胞增殖及生长激素表达的研究

摘要

垂体腺瘤是一种常见的脑内良性肿瘤，由于肿瘤本身的压迫及激素分泌失调而产生一系列临床症状。溴隐亭和生长抑素虽对部分功能性垂体腺瘤患者有效，但仍有一些患者有耐药和不耐受现象。在天然药物中筛选更加安全有效的新型药物治疗垂体瘤越来越受到人们的关注。 青蒿素是我国药学工作者于1971年从植物黄花蒿叶中提取分离得到的一个具有过氧桥的倍半萜内酯，经化学改造可生成双氢青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯等多种衍生物。其中，青蒿琥酯由于水溶性强，作用起效快，临床上常用于治疗脑疟和危重昏迷的疟疾患者。青蒿素类药物之前广泛应用于抗疟疾治疗，近年来研究发现，青蒿素及其衍生物对多种肿瘤都有抑制作用。但在垂体瘤还未见报道。本文主要探讨青蒿素衍生物青蒿琥酯(Artesunate，ART)对垂体瘤细胞增殖和生长激素(Growth Hormone，GH)表达的影响。 目的： 研究青蒿琥酯能否有效抑制垂体瘤GH3细胞增殖，降低GH表达，并初步探讨其可能的作用机制，为青蒿琥酯用于垂体瘤治疗提供科学的实验依据。 方法： 1.体外培养GH3垂体瘤细胞系，制作生长曲线；原代培养胎鼠成纤维细胞(MEFs)与大鼠骨髓基质干细胞(MSCs)； 2.利用四唑盐比色法(MTT)检测ART对GH3垂体瘤细胞及正常细胞(MEFs和MSCs)的增殖抑制作用； 3.DAPI染色观察ART作用GH3后细胞核形态的改变； 4.流式细胞仪检测ART作用GH3后细胞凋亡率的变化； 5.MTT比较ART+ caspase抑制剂(Z—VAD—FMK)联合孵育和ART单独作用后，GH3细胞抑制率的改变； 6.流式细胞仪检测用药后细胞周期分布情况； 7.Western—Blot检测ART作用后，GH蛋白的变化情况； 结果： 1.GH3、MEFs及MSCs细胞生长状态良好，可用做实验； 2.ART以一种时间剂量依赖性的方式抑制GH3细胞的生长，而对这两种正常细胞的影响很小，差异具有显著性； 3.ART作用GH3后，DAPI染色可见有凋亡小体的存在； 4.流式细胞仪结果显示ART能诱导GH3细胞的凋亡，凋亡率随药物作用时间延长而增加； 5.MTT显示ART+ caspase抑制剂Z—VAD—FMK联合用药组的细胞抑制率要低于ART单独用药组； 6.细胞周期动力学实验结果显示大鼠GH3细胞在ART作用后细胞阻滞于G2/M期，处于S期的细胞数目减少； 7.Western—Blot结果显示，随着ART药物浓度的增加和作用时间的延长，GH蛋白水平的表达呈逐渐降低趋势； 结论： ART可选择性抑制垂体瘤GH3细胞，诱导其发生凋亡，并能降低GH3细胞GH的表达，可能作为垂体瘤治疗的一种候选药物。

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绪 论

第一章 青蒿琥酯对大鼠GH3垂体瘤细胞的选择性抑制作用

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第二章 青蒿琥酯可诱导大鼠GH3细胞凋亡

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

第三章 青蒿琥酯可抑制GH3细胞生长激素的表达

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

结 论

参考文献：

附图

致谢