高血压大鼠左心室肥大心肌细胞中Src表达的研究

摘要

目的：通过检测c—Src在高血压大白鼠左心室肥大心肌细胞中表达和定位的变化，表明c—Src参与了高血压心脏肥大重塑时心肌细胞信号的转导，探讨Src在慢性压力负荷下左心室肥大发病机制中的作用。 方法： 1、实验动物：以2、6、12、24月龄的自发性高血压（Spontaneously Hypertensive，SH）大白鼠为研究对象，按月龄分组，每月龄各6只。相同月龄Wistar—Kyoto（WKY）大白鼠为对照组，按月龄分组，每月龄各6只。 2、蛋白质分离和蛋白质印迹（Western Blotting，WB）方法：将左心室组织分别制成含有总蛋白、胞质蛋白、膜蛋白和核蛋白的组织匀浆，检测c—Src在各月龄SH大白鼠左心室组织各细胞成份中的表达。 3、免疫荧光染色方法和共聚焦显微镜观察：对SH大白鼠左心室组织冰冻切片进行免疫荧光标记，通过共聚焦显微镜观察c—Src在心肌细胞中的分布。 4、统计学分析：采用SPSS13．0统计软件进行数据分析。各月龄组中SH大白鼠左心室组织c—Src的表达量与相应的WKY对照组进行两样本显著性差异比较采用t检验，各月龄组之间SH大白鼠左心室组织中c—Src的表达量显著性差异比较采用单因素方差分析（one—way ANOVA），P<0．05表示差异有统计学意义。 结果： 1、WB结果显示：c—Src在各月龄SH组大白鼠左心室心肌组织匀浆（总蛋白）中的表达与相同月龄WKY组大白鼠相比差异无统计学意义；但是，在左心室心肌组织抽提的细胞质蛋白匀浆中，各月龄SH组与相同月龄WKY组比较，2月龄时差别无统计学意义，在6、12、24月龄时，SH组比WKY组均有显著性减少；而在左心室心肌组织抽提的膜蛋白匀浆中，各月龄SH组与相同月龄WKY组比较，在2月龄时差别无统计学意义，在6、12、24月龄时SH组比WKY组显著性增加；在各月龄SH组大白鼠左心室心肌组织抽提的核蛋白匀浆中的表达与相同月龄WKY组相比差异无统计学意义。 2、免疫荧光染色结果显示：2月龄时，SH大白鼠与WKY大白鼠心肌细胞中c—Src的荧光分布基本相似，心肌细胞胞浆出现弥漫性较均匀分布的绿色荧光，核内有极弱的小颗粒点状荧光，在WKY大白鼠心肌细胞中，这一荧光分布特征在6、12和24月龄均无明显变化，但在SH大白鼠心肌细胞中，在6、12和24月龄有明显的定位变化，表现为细胞浆内的荧光稍有减弱、分布不均一并向细胞膜（尤其是闰盘）和核膜及核周聚集现象，于是在心肌细胞闰盘观察到明亮的线状荧光和细胞核膜附近区域出现明亮的荧光颗粒。 结论：免疫荧光和WB结果均显示：从6月龄开始，SH大白鼠左心室肥大心肌细胞中，存在c—Src在细胞质中表达的减少及细胞膜表达的增加和细胞核膜及核周的聚集，并持续到12、24月龄，表明在高血压致失代偿性心肌肥大形成和发展全过程中存在c—Src转位，提示心肌细胞Src激酶信号转导通路有可能参与了高血压所致的失代偿性心室肥大的心肌重建过程。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词中英文对照表

声明

第1章前言

1.1 Src的结构

1.2 Src的功能

1.3 Src与高血压心肌肥大发病机制的关系

第2章材料与方法

2.1 主要实验仪器和试剂

2.2实验方法

第3章结果

3.1 实验组与对照组心脏重量指标比较

3.2 WB结果

3.3免疫荧光结果

第4章讨论

结论

参考文献

致谢

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