环淫羊藿苷元抗炎、免疫抑制作用研究

摘要

第一章：环淫羊藿苷元抗炎作用及其机制研究
　　 一、目的：
　　 巨噬细胞是重要的免疫细胞，活化的巨噬细胞分泌细胞因子及炎症介质在炎症的发生、发展起重要的作用。传统中药淫羊藿表现出多种药理学作用。在本研究中我们通过建立脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞株RAW264.7活化，角叉菜胶小鼠足垫注射诱导的体内、体外炎症模型来观察环淫羊藿苷元的抗炎作用并探讨其可能的作用机制。
　　 二、方法：
　　 培养RAW264.7细胞，预先加入环淫羊藿苷元孵育2小时(浓度为0.8、4、20μM)，后加入终浓度为200 ng/ml的LPS刺激，建立细胞炎症模型。采用ELISA的方法测定培养上清液中TNF-α浓度，RT-PCR方法测定COX-2的mRNA表达。蛋白印迹实验测定iNOS、p38MAPK、p-ERK1/2、p-JNK、IκBα、NF-κBp65亚基的表达。
　　 连续口服灌胃给予环淫羊藿苷元7天，小鼠足垫注射角叉菜胶引起急性炎症，产生足垫肿胀，游标卡尺测定足垫前后厚度计算肿胀率。
　　 三、结果：
　　 1、RAW264.7细胞在LPS刺激下分泌大量TNF-α，并引起COX-2 mRNA表达和iNOS蛋白表达。环淫羊藿苷元预孵育能剂量依赖性的减低RAW264.7细胞在LPS刺激下生成TNF-α，降低炎症介质COX-2 mRNA表达和iNOS蛋白表达。
　　 2、RAW264.7细胞在LPS刺激下引起p38MAPK，ERK1/2、JNK磷酸化表达。环淫羊藿苷元能剂量依赖性降低p38MAPK磷酸化表达，但对ERK1/2、JNK磷酸化表达无影响。
　　 3、RA4264.7细胞在LPS刺激下引起IκBα的降解和NF-κBp65亚基的核转位。环淫羊藿苷元能减弱IκBα的降解和NF-κBp65亚基的核转位。
　　 4、环淫羊藿苷元能减轻角叉菜胶引起急性足肿胀。
　　 四、结论：
　　 1、环淫羊藿苷元在体内、体外表现出抗炎作用。
　　 2、环淫羊藿苷元可能通过抑制p38MAPK通路和NF-κB通路来实现对巨噬细胞活化的抑制。
　　 第二章：环淫羊藿苷元免疫抑制作用及其机制研究
　　 一、目的：
　　 T淋巴细胞的活化表现为细胞克隆增殖和分泌细胞因子，是免疫应答的重要环节。前期研究表明环淫羊藿苷元表现出免疫抑制效应。本研究利用分离的小鼠脾脏细胞及人白血病T细胞株(Jurkat细胞)观察环淫羊藿苷元对淋巴细胞活化的影响，探讨可能的机制。同时观察在整体动物上淫羊藿苷元对卵清蛋白诱导的迟发型超敏反应的效应。
　　 二、方法：
　　 体外分离和培养小鼠脾脏细胞，预先加入环淫羊藿苷元孵育2小时，以刀豆蛋白A(ConA)刺激脾细胞的活化。采用MTT方法测定脾细胞增殖，ELISA方法测定细胞因子IFN-γ、IL-2的浓度，流式细胞仪测定T淋巴细胞早期活化蛋白CD69的表达，观察药物干预对脾脏细胞活化的影响。
　　 不同种属的小鼠脾脏细胞等量混合，建立混合淋巴细胞反应，预先加入环淫羊藿苷元，观察药物干预对混合淋巴细胞反应的影响。
　　 自卵清蛋白对小鼠致敏首日，灌胃给予环淫羊藿苷元连续7天至抗原激发迟发型超敏反应，测定DTH反应引起的足垫肿胀率，观察药物干预对迟发型超敏反应的影响。
　　 以CD3/CD28或佛波醇酯PMA激活Jurkat细胞，用Western Blot方法测定Jurkat细胞中p38MAPK，ERK蛋白磷酸化的表达。观察药物干预对Jurkat细胞激活的影响。
　　 三、结果：
　　 1、刀豆蛋白A(ConA)刺激脾细胞的活化，引起细胞增殖和细胞因子IFN-γ、IL-2分泌及T淋巴细胞表达早期活化蛋白CD69。环淫羊藿苷元能剂量依赖性抑制T淋巴细胞激活引起的细胞增殖和细胞因子IFN-γ、IL-2分泌，减少T淋巴细胞表达CD69。
　　 2、环淫羊藿苷元能剂量依赖性抑制混合淋巴细胞反应引起的增殖。
　　 3、环淫羊藿苷元能剂量依赖性抑制卵清蛋白在小鼠足垫上诱导的迟发型超敏反应。
　　 4、环淫羊藿苷元能剂量依赖性抑制CD3/CD28刺激Jurkat细胞引起的p38MAPK，ERK磷酸化表达。
　　 5、环淫羊藿苷元不能抑制佛波醇酯(PMA)刺激Jurkat细胞引起的ERK磷酸化表达。
　　 四、结论：
　　 1、环淫羊藿苷元表现出体内、体外免疫抑制的活性，有可能发展成为有效的免疫抑制剂。3、环淫羊藿苷元的免疫抑制作用可能与抑制T淋巴细胞中p38MAPK和ERK信号通路有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

第一章：环淫羊藿苷元抗炎作用研究

前言

材料与方法

实验结果

第一章 讨论

结论

参考文献

第二章：环淫羊藿苷元免疫抑制作用研究

前言

第二章 材料与方法

实验结果

第二章 讨论

结论

研究的创新性及展望

参考文献

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