腰椎间盘髓核细胞活性与MRI退变分型的相关性研究

摘要

研究背景和目的
　　 退行性椎间盘疾病是脊柱外科最常见的病变之一，其退变过程缓慢进展。根本病因尚未明确，目前所知椎间盘退变是在多种机制及细胞因子的共同作用下，椎间盘内的生化结构发生了改变，包括：椎间盘细胞的活性降低，髓核内水分丢失，组织成份发生改变，退变时椎间盘中蛋白多糖、糖胺聚糖下降，含水量减少。因椎间盘形态和生化结构发生变化，其缓冲、分散压力传导的能力下降，机械性能发生改变。有动物实验研究证明，髓核细胞活性的降低是椎间盘退变的重要特点。随着年龄的增长，椎间盘内的脊索细胞消失，类软骨细胞活性降低，同时伴有细胞外基质分泌减少，胶原成分改变，这些改变使得髓核细胞分泌外基质的能力降低，无法维持正常的椎间盘内部环境的平衡，正常的椎间盘结构发生破坏，最终导致其机械结构的失稳。
　　 在临床工作中，很难对微观的生物学进行直接评估。随着影像学技术的发展，MRI已经成为各级别医院常规的检查手段之一，其已被公认为目前诊断椎间盘退变最合理精确的手段。近年来出现了很多基于MRI的椎间盘退变分型，其中最广泛被接受的MRI退变椎间盘分级为Pearce制定的五分级法，是目前能较好反应椎间盘退变的分类方法。
　　 本研究通过实验，对不同退变程度腰椎间盘的髓核细胞进行培养及活性测定，明确髓核细胞活性与MRI退变分型的相关性。
　　 方法
　　 实验共取腰椎间盘髓核组织20例，均为我科收治单一手术节段患者，其中A组2例，为正常椎间盘髓核组织(PearceⅠ&Ⅱ型，脊柱外伤患者，年龄为22岁和24岁)；B、C、D三组分别6例，分别为MRI分型轻、中、重度(PearceⅢ型，Ⅳ型，V型患者)退变椎间盘髓核组织(患者年龄在3545岁之间)，均在同样条件下进行体外髓核细胞分离培养。
　　 术中取得腰椎间盘髓核组织送入实验室，进行髓核细胞的分离与原代培养，实验过程采用传一代细胞，消化原代细胞计数后定量分置于培养板培养，于5d，10d，15d，20d，25d五个时间段消化用以细胞计数法和MTT比色法检测细胞活性。
　　 结果
　　 细胞计数结果：传一代髓核细胞计数在同时间点上A组明显高于B、C、D组，B组与C、D组之间存在统计学差异(P＜0.05)，C组和D组之间细胞计数无统计学差异，细胞计数的峰值出现在第20天。
　　 MTT法测定结果：B、C、D组之间OD值(吸光值)在同时间点，各组之间均存在统计学差异(P＜0.05)，退变细胞OD值峰值出现在第20天，此后开始下降，提示细胞活性降低；正常髓核细胞OD值下降出现在25天之后。
　　 结论
　　 1.正常腰椎间盘组织髓核细胞活性明显高于退变椎间盘髓核细胞。
　　 2.MRI分型轻、中、重度退变腰椎间盘髓核细胞活性与其分型基本相符。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

1.椎间盘退变与髓核细胞的关系

2.椎间盘退变的影像学诊断

3.离体髓核细胞的培养

4.椎间盘退变的治疗

5.本课题的提出

材料与方法

1.材料

2.方法

结果

1.髓核细胞的原代培养

2.髓核细胞的传代培养

3.髓核细胞增殖曲线和MTT法曲线

讨论

1退变髓核细胞体外生长特点

2.髓核细胞活性测定的意义

3.体外髓核细胞活性和退变椎间盘MRI影像学分型相关性及其意义

全文结论

展望

参考文献

附图

致谢