Aurora激酶抑制剂对耐维甲酸急性早幼粒细胞白血病作用的体外研究

摘要

背景：Aurora激酶的主要作用是在细胞周期中确保染色体的精确组装，在细胞分裂过程中维持基因的完整性。VX-680是Aurora激酶的一种小分子抑制剂，干扰有丝分裂的进程及双极纺锤体的形成。本文的研究目的是探讨VX-680能否在体外作为一个有潜力的抑制剂靶向抑制耐维甲酸(ATRA)的急性早幼粒细胞白血病(APL)。
　　 方法：流式细胞仪检测ATRA处理72h后的APL细胞株NB4(ATRA敏感株)及NB4-R2(ATRA耐药株)表面髓系分化标志CD11b的表达来评价ATRA对NB4及NB4-R2细胞的分化作用；免疫荧光染色分析VX-680处理的NB4-R2细胞单极纺锤体的形成；四甲基偶氮唑比色法(MTT实验)评价VX-680对NB4-R2细胞增殖的抑制作用；亚二倍体凋亡峰(SubG1)分析法及Annexin V/PI染色法检测VX-680对NB4-R2细胞的凋亡促进作用；Hoechst33342染色鉴别VX-680处理的NB4-R2细胞凋亡的形态变化；蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定VX-680处理的NB4-R2细胞中Aurora-A的活性的改变及凋亡相关信号途径蛋白(Akt-1，caspase-3，PARP)的表达；JC-1荧光探针检测VX-680处理的NB4-R2细胞线粒体膜电位变化。
　　 结果：
　　 1.ATRA体外能够诱导NB4细胞的分化，但不能诱导NB-R2细胞分化。
　　 2.VX-680体外能抑制NB4-R2细胞增殖。3.VX-680可通过降低Aurora-A激酶磷酸化活性位点Thr288的自我磷酸化抑制Aurora-A激酶的活性，以及诱导耐维甲酸细胞株NB4-R2细胞产生单极纺锤体来抑制NB4-R2细胞增殖。4.亚二倍体凋亡峰(SubG1)检测法、Annexin V/PI染色法及Hoechst33342染色法均能证实VX-680通过凋亡途径抑制NB4-R2细胞增殖。5.JC-1荧光探针法及蛋白质免疫印迹法证实VX-680可通过促进NB4-R2细胞线粒体膜去极化，最终激活了easpase-3，PARP信号通路相关的细胞凋亡，同时发现Akt信号途径也参与细胞凋亡。
　　 结论：Aurora激酶抑制剂VX-680可以通过促进NB4-R2细胞单级纺锤体形成以及启动线粒体膜的去极化，降低Akt-1磷酸化活性，激活caspase凋亡途径来抑制其增殖。

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