分子印迹固相萃取-高效液相色谱法在食品危害残留物分析的应用研究

摘要

食品安全是一个日趋重要的公共卫生议题，食品中化学污染是近几年来国际社会开始研究的公共卫生问题之一。食品中化学污染物残留的特点是样品中残留物水平很低，样品基质复杂，干扰物质多，不易从样品中分离、纯化残留物。分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymer,MIP)由于具有高度交联的结构，稳定性好，能够在高温、高压、有机溶剂、酸、碱等苛刻环境中使用，造价低廉，是分子识别领域的理想敏感材料。分子印迹固相萃取(molecularly imprinted solidphase extraction，MISPE)不仅适用于复杂基体样品的净化，还适用于需要大量富集的样品前处理。本课题基于分子印迹技术的样品快速前处理方法，开展了水产品中的孔雀石绿(MG)、结晶紫(GV)及其代谢产物和辣椒制品中水溶性、脂溶性合成色素分子印迹固相萃取-高效液相色谱分析方法的研究，主要研究内容如下：
　　 1.概述了MISPE技术的特点，综述了MISPE原理、制备技术的研究进展。介绍了分子印迹技术的原理，简介了MIP的制备条件和制备方法，综述了分子印迹技术在食品样品前处理的应用进展。
　　 2.建立了柱后衍生-高效液相色谱法测定水产品中的孔雀石绿(MG)及其代谢产物的分析方法。对水产品样品的提取和净化条件进行了改进，建立了一种新的衍生反应方法，采用了环保且易获得的碘溶液为衍生剂，隐性孔雀石绿的在线衍生实验效率取决于碘衍生剂条件。通过实验，对碘衍生剂的浓度、pH值及温度条件进行了优化，寻找信号/噪音比(S/N)最大值。方法评价按照欧盟2002/657/EC号文件的规定对回收率、准确度、精密度、实验室重现性、稳定耐用性进行实验验证，实现了草鱼、虾和贝壳类不同种水产品中孔雀石绿和隐性孔雀石绿及其代谢产物多残留的筛选。
　　 3.建立了柱后衍生-高效液相色谱法测定水产品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿的分析方法。利用分子印迹固相萃取柱，离线处理样品，采用高效液相色谱法测定了水产品中的孔雀石绿结晶紫及其代谢物。通过沉淀聚合法，以甲基丙烯酸(MAA)为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂，合成了一种新型的印迹材料，并用于固相萃取柱填料。利用洗脱实验评价印迹固相萃取柱的效果和选择性。结果表明：印迹固相萃取柱对孔雀石绿和结晶紫及其代谢物具有很高的萃取选择性。用溶剂标准曲线计算孔雀石绿结晶紫及其代谢物在草鱼中的平均回收率为89.89％～99.1％，在虾中的平均回收率为90.6％～101.2％，贝壳中的平均回收率为91.3％～96.3％。这三种水产品中的检测限(CCα))为0.11μg k-1～0.14μg kg-1，检测能力(CCβ)为0.19μg kg-1～0.24μg kg-1。
　　 4.建立了辣椒制品中的水溶性和脂溶性合成色素高效液相分析方法。利用沉淀聚合法合成了分子印迹聚合物，用4-乙基吡啶(4-VP)用为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂，甲酸-甲醇为洗脱剂研究了洗脱效果。由于分子印迹聚合物与水溶性、脂溶性合成色素之间存在疏水作用和离子交换作用，因此具有很高的萃取选择性。利用上述材料对于辣椒制品中的3种水溶性和6种脂溶性色素进行样品净化处理，高效液相色谱法对辣椒制品中的9种合成色素进行了测定。结果表明，平均加收率为：辣椒酱72.1％～95.6％，辣椒粉72.1％～92.3％，样品中的检测限(CCα)为1.2μg kg-1～1.6μg kg-1，检测能力(CCβ)为1.9μg kg-1～2.4μg kg1。
　　 5.建立了对位红、苏丹红G、苏丹Ⅰ、苏丹Ⅱ、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ等六种脂溶性苏丹红染料的检测方法。利用甲酸提取样品中的脂溶性苏丹红染料，用氯仿萃取净化，建立了高效液相色谱测定六种脂溶性苏丹红染料的方法，并将所建立的方法应用于辣椒制品中合成色素的测定，辣椒粉在日内和日间平均回收分别为94.9％～101.2％和94.9％～100.3％，精密度为2.9％～4.0％和3.7％～4.9％；辣椒酱在日内和日间平均回收分别为94.1％～99.2％和94.2％～98.6％，精密度为2.8％～3.8％和3.3％～4.2％。方法简单易行、快速、灵敏度高，适用于政府监管部门开展日常和专项监督抽验的快速检测方法。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章 绪论

1.1高效液相色谱检验技术

1.2样品前处理

1.3分子印迹

1.4立题意义、研究目标及现状

参考文献

第2章 柱后衍生-高效液相色谱法测定水产品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿的研究

2.1引言

2.2实验部分

2.3结果与讨论

2.4结论

参考文献

第3章 分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿及其代谢产物的研究

3.1前言

3.2实验部分

3.3结果与讨论

3.4结论

参考文献

第4章 分子印迹固相萃取-高效液相色谱法测定辣椒制品中的水溶性和脂溶性合成色素

4.1前言

4.2实验部分

4.3结果与讨论

4.4结论

参考文献

第5章 辣椒制品中脂溶性苏丹红染料的快速检测研究

5.1前言

5.2实验部分

5.3结果与讨论

5.4结论

参考文献

攻读博士期间发表的学术论文

致谢