三阴性乳腺癌组织中PD-L1蛋白表达及肿瘤浸润淋巴细胞数目与患者预后分析

摘要

背景：2015年ACS公布的癌症统计显示乳腺癌占美国女性肿瘤新发病的第一位（25％），有超过4万名女性死于乳腺癌，占死亡总数的15%1。2012年全球癌症统计显示，与2008年相比，全球乳腺癌患者增长20%以上，死亡率增长14%，其中我国乳腺癌患病人数为69.7万，死亡人数为4.8万2，在2011年分型中，人表皮生长因子受体2(HER2)阳性的乳腺癌患者，在使用靶向药物治疗后生存明显获益，在一些发达国家中，五年生存率已到达90%3。然而对于受体三阴性乳腺癌患者来说，因为缺少特异性的靶点，所以要面临复发早、进展快，生存期短等问题。由于对内分泌治疗及抗HER2的靶向药物治疗不敏感，三阴性乳腺癌患者的五年生存率仅有60%4，找出新的治疗的策略迫在眉睫。
　　程序性死亡配体1(Programmed death ligand1,PD-L1)作为免疫球蛋白超家族负性共刺激分子的重要成员，参与机体免疫调节过程。PD-L1是程序性死亡受体-1（Programmed death1，PD-1）的主要配体，PD-1是1992年由Ishida等在对T细胞杂交瘤的凋亡研究中发现的与细胞凋亡相关的蛋白5，1999年PD-1的配体被Dong等发现并且取名为PD-L1，随后命名为CD2746；进一步研究发现PD-L2，命名为CD2737。PD-1：PD-L1信号通路可以通过对T细胞的抑制负调控免疫应答，进而在免疫耐受，微生物感染，肿瘤免疫逃逸，过敏中发挥重要作用。TIL与PD-1是T淋巴细胞活化过程中重要的负性共刺激分子，可以抑制激活T淋巴细胞，避免肿瘤细胞受到T淋巴细胞的攻击。部分早期研究显示PD-1和TIL也与较差的预后相关8。同时也有学者发现PD-1的配体PD-L1在部分TIL表明也有所表达，通过联合其他TIL表面上的PD-1发挥作用9,10。关于PD-L1在乳腺癌中表达的数据非常有限，近期一些研究指出，PD-L1在乳腺癌中的表达可作为不良预后10和保护性因素11的预测指标。同时一项大样本的独立队列研究表明，三阴性乳腺癌中PD-L1的表达明显高于非三阴性乳腺癌患者，并且癌巢内CD8+T细胞的表达也与PD-L1的阳性表达有关，但预后的意义不明确，而三阴性乳腺癌中PD-L1与TILs之间的关系尚未见报道。
　　本研究对中山肿瘤医院及我院共215例三阴性乳腺癌患者PD-L1与肿瘤浸润淋巴细胞TIL进行评估，分析PD-L1与TIL之间的关系与对患者的临床结局的影响。
　　目的：在乳腺癌中，三阴性乳腺癌（TNBC）的预后较差，所以有必要找出一个有效的治疗策略。目前研究发现PD-L1通路在肿瘤免疫逃逸中有着重要地位，所以推测阻断PD-1：PD-L1通路可以增加T细胞的抗肿瘤免疫活性及提高宿主抗肿瘤免疫反应。抗PD-1及抗PD-L1抗体已经在实验中观察到具有明显抗肿瘤活性12，然而目前关于PD-L1在TNBC中的临床研究及分析数据不足。
　　资料与方法：选取中山大学肿瘤医院及中山大学第一附属医院组织标本库中1999年7月至2012年10的三阴性乳腺癌患者215例，215例组织样本被制成组织芯片，所有病例均为女性，年龄在27-78岁，中位随访年龄为49岁。用免疫组化和苏木素染色的方法检测215例三阴性乳腺癌组织中PD-L1和TILs的表达，并分析其与患者各项临床病例特征及预后的关系。
　　现今对PD-L1的判定标准尚未统一，推荐使用的方法是对组织细胞着色程度与被染色细胞数目进行评分，被染细胞数与着色程度得分的乘积：≤1记为阴性，＞1记为阳性。其中（-）记为PD-L1阴性患者，（+）记为PD-L1阳性的患者。
　　TIL是有两位高年资病理科医生在双盲条件下分别对肿瘤间质和肿瘤内的TIL进行观察，其中阳性细胞数在0%-10%记为低表达；11%-40%记为中度表达；41%-100%记为高表达。除此还将TIL≥50%的患者记为淋巴细胞主导型乳腺癌患者（LPBC），TIL＜50%的患者为非淋巴细胞主导型乳腺癌患者。
　　统计学方法：应用SPSS19.0统计学软件对结果进行统计，卡方检验对计数资料进行分析，使用Kaplan-Meier对总生存率和无病生存率进行分析，对于单因素分析后有有统计学意义的因素用非条件Logistic回归进行统计学分析。
　　结果：中位随访时间为67.7个月（7个月-159个月）。PD-L1阳性的患者中位总生存时间为89个月，PD-L1阴性的患者中位总生存时间为72个月,P=0.019,P<0.05，有统计学意义。PD-L1阳性的患者中位无病生存时间为137个月，PD-L1阴性的患者中位无病生存时间为116个月,P=0.046,P<0.05，有统计学意义。在TNBC患者中PD-L1阳性的患者中位总生存时间及中位无病生存时间比PD-L1阴性的患者明显延长。
　　STILs高表达患者的中位总生存时间为107个月，STILs中度表达患者的中位总生存时间为82个月，STILs低表达的患者中位总生存时间为64个月，P=0.026,P<0.05，有统计学意义。STILs高表达的患者中位无病生存时间为126个月，STILs中度表达的患者中位无病生存时间为135个月，STILs低表达的患者中位无病生存时间为119个月，P=0.325,P≥0.05，无统计学意义。在TNBC患者中STILs高表达的患者具有更长的中位总生存时间。(P=0.026)。
　　多因素COX回归分析结果显示PD-L1、STILs是三阴性乳腺癌患者生存的独立因素。在STILs≥50%（LPBC）的患者中PD-L1蛋白表达率高于STILs<50%的患者，（P=0.004）。
　　结论：在TNBC患者中PD-L1、STILs与患者生存及预后密切相关。PD-L1阳性表达且（或）STILs高表达的患者预后良好。