缝隙连接细胞间通讯在大鼠骨髓基质细胞成骨分化中的作用

摘要

目的：探讨缝隙连接细胞间通讯在大鼠骨髓基质细胞成骨分化中的作用。
　　 方法：采取全骨髓贴壁分离筛选法从雄性Sprague-Dawley大鼠中的股骨、胫骨中提取骨髓基质细胞并在L-DMEM中进行培养。细胞传代培养至第3代时，分成对照组、诱导组、实验组共3组，选用地塞米松+β-甘油磷酸钠+维生素C为成骨诱导剂、18α-甘草次酸为缝隙连接通讯阻滞剂，3组细胞分别加入培养液、培养液+成骨诱导剂、培养液+成骨诱导剂+18α-甘草次酸进行培养。培养过程中在不同时间点检测各组细胞的增殖、碱性磷酸酶相对活性，同时在第7天应用细胞免疫荧光技术定位缝隙连接蛋白43，RT-PCR法检测缝隙连接蛋白43、骨钙素、骨涎蛋白的mRNA水平。在第10天应用划痕标记染料示踪法评估缝隙连接细胞间通讯功能，在第21天茜素红S染色法检验基质中钙结节形成能力。
　　 结果：在第7、9天的增殖能力，实验组＜诱导组＜对照组。第9、11天的碱性磷酸酶相对活性，对照组＜实验组＜诱导组。第7天，发现缝隙连接蛋白43定位于胞浆、胞膜，缝隙连接蛋白43的mRNA水平诱导组和实验组间无显著差别，但均高于对照组；骨钙素、骨涎蛋白的mRNA对照组＜实验组＜诱导组。第10天，显示缝隙连接通讯功能对照组＜实验组＜诱导组（均以P＜0.05为有显著统计学意义）。第21天，钙结节形成能力方面，肉眼观察显示实验组＜诱导组，对照组无钙结节形成。
　　 结论：18α-甘草次酸能通过阻滞由缝隙连接蛋白43介导的缝隙连接细胞间通讯能力，从而减弱成骨诱导剂对大鼠基质细胞的成骨分化作用。

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第一章 材料和方法

第二章 结果

第三章 讨论

第四章 结论

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