水疱性口炎病毒糖蛋白修饰的类病毒体的批量制备

摘要

类病毒体作为一种新型的治疗载体得到了广泛的研究，但目前方法制备的类病毒体存在免疫原性，安全性，操作费时等缺点。为避免传统制备方法存在的问题，我们直接以表达病毒融合蛋白VSVG的细胞为原料进行类病毒体的制备。
　　首先我们通过构建VSVG重组腺病毒和构建可诱导型VSVG表达质粒获取瞬时和稳定表达VSVG的细胞,融合实验结果显示两种细胞均能在其细胞膜上表达成熟的VSVG。为保证制备细胞质膜微囊的完整性，我们使用化学诱导的方法制备PMVs，实验结果显示碘乙酸钠诱导剂相对于甲醛诱导剂对VSVG的功能无显著影响。且通过化学诱导获得的PMVs含有丰富的胞浆蛋白和VSVG。最后我们使用正辛酸溶解的方法将细胞质膜微囊转变为类病毒体。原子力显微镜检测结果显示，我们得到的类病毒体形态均一，与传统方法制备的类病毒体和病毒大小类似。荧光示踪试验结果显示，我们制备的类病毒体可以被细胞有效的摄取。这种简便，安全的类病毒体制备方式将会进一步促进基因治疗的发展。

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第1章 前言

1.1 类病毒体的研究进展

1.2 病毒融合蛋白

1.3 水疱性口炎病毒糖蛋白

1.4 Tet系统

1.5 实验设计

第2章 实验材料与方法

2.1 主要的实验试剂和材料

2.2 主要仪器设备

2.3 主要实验方法

第3章 实验结果与分析

3.1 VSVG表达细胞的构建

3.2 细胞质膜微囊的制备及表征

3.3 类病毒体的制备及表征

第4章讨论

4.1 病毒融合蛋白的选择

4.2 VSVG的表达

4.3 细胞膜制备方法

4.4 类病毒体的制备方法

第5章 结论与展望

5.1 结论及创新点

5.2 展望

参考文献

附录一 试剂配制

附录二 相关载体

附录三 Marker

致谢

在校期间科研情况

个人简历