脑不对称BALB/c小鼠天敌应激后血浆皮质酮和TNF-α的变化研究

摘要

背景与目的：
　　脑不对称是一个广泛存在的生物学现象,主要表现在大脑左右两半球在解剖结构和生理功能上的异质性。通过动物实验以及临床观察发现,大脑左右两半球对免疫功能具有相反的调节作用,而且,动物及人类行为不对称与免疫系统间也存在密切的关系。采用伸爪取食的方法来区分小鼠的利爪性是人们普遍接受的区分小鼠脑不对称性的模型,通过该模型可以将小鼠分为:左利鼠、右利鼠和双利鼠。新近的研究表明脑不对称可影响细胞因子的产生,例如TNF-α。过去的研究结果表明,天敌应激后左利鼠的血浆IL-1β水平显著高于右利鼠。但是,目前人们对脑不对称小鼠在天敌应激后机体内(Hypothalamic-Pituitary-Adrenocortical Axis,HPA)相关的激素和细胞因子的变化情况了解的还不是很多。为此,本文在前人工作的基础上开展了如下的研究:
　　1.探讨急性天敌应激和慢性天敌应激对脑不对称小鼠血浆皮质酮和TNF-α浓度的影响以及与机体免疫的关系。
　　2.探讨急性天敌应激后脑不对称小鼠血浆皮质酮和TNF-α浓度的动态变化。
　　3.探讨急性天敌应激和慢性天敌应激对脑不对称小鼠左右侧海马及肝脏中糖皮质激素受体基因水平和蛋白水平表达的变化情况及与脑不对称的关系。
　　材料和方法:
　　健康雌性BALB/c小鼠101只,运用伸爪取食法按伸爪50次中伸右爪的次数给每只小鼠评分,将小鼠分为左利鼠、右利鼠和双利鼠3组。区分利爪性1w后将左利组和右利组小鼠再分为正常生理组、急性应激组和慢性应激组。急性应激组给予单次60min的天敌应激,应激之后分别于0hr,2hr,6hr,12hr处死小鼠并收集样本,慢性应激组连续14d每天给予60min的天敌应激,应激结束后立即处死收集样本。应激实验于上午9:00-11:00进行。小鼠处死之后,用放置于冰上已抗凝的离心管收集血液,离心后取血浆用于检测血浆皮质酮和TNF-α含量(ELISA法);另外,在冰上迅速分离出左右侧大脑皮层、左右双侧海马、下丘脑以及肝脏,取部分组织用TRIzol?法提取总RNA,另外取组织用RIPA裂解法提取总蛋白。提取的RNA经逆转录合成cDNA后用Real-TimePCR定量检测糖皮质激素受体(Glucocorticoids Receptor,GR)mRNA的水平。提取的总蛋白用Western blot检测GR的蛋白水平。
　　结果：和结论:
　　1.脑不对称小鼠血浆皮质酮水平:正常生理状况下,左利、右利鼠皮质酮水平较低;水平相近;慢性应激后,血浆皮质酮水平右利鼠与对照组相比具有显著性升高(P<0.05)。急性应激0h,2h,6h,12h后小鼠血浆中CS水平与正常对照组相比无统计学差异。
　　2.脑不对称小鼠血浆TNF-α水平:正常生理状况下,左利、右利鼠TNF-α水平较低,水平相近;急性应激后,两组水平均显著升高(P<0.05),而且左利鼠TNF-α水平显著高于右利鼠(P<0.05)。急性应激后6hr血浆TNF-α达到分泌高峰,此后呈回落趋势。慢性应激后,左利鼠和右利鼠血浆TNF-α水平相对于急性应激组和正常组都有显著性升高(P<0.05)。
　　3.正常生理状况下左利鼠左侧海马GRmRNA表达水平显著高于右利鼠左侧海马P<0.05),左利鼠右侧海马GRmRNA水平显著高于右利鼠右侧海马(P<0.05)。无论是左侧海马区还是右侧海马区左利鼠在急性应激和慢性应激之后GRmRNA都出现了显著性地下调(P<0.05)。
　　4.正常生理状况下左利鼠和右利鼠肝脏中GRmRNA表达都比较高,水平相近。急性应激后都出现了显著性下调(P<0.05)。相对于正常生理组,慢性应激后,左利鼠和右利鼠肝脏中GRmRNA表达都显著性下调(P<0.05),但是相对于急性应激组则没有显著性变化。
　　5.正常生理状况下左利鼠和右利鼠左右两侧海马中GR蛋白表达都比较高,水平相近。急性应激后左利鼠左侧海马、左利鼠和右利鼠的右侧海马中GR蛋白表达均显著下调(P<0.05)。慢性应激后,左利鼠双侧海马和右利鼠双侧海马中GR蛋白都显著性下调(P<0.05),相对于急性应激,左利鼠右侧海马GR蛋白显著下调(P<0.05)。
　　6.正常生理状况下左利鼠和右利鼠肝脏GR蛋白表达都比较高水平相近,急性和慢性应激后左利鼠和右利鼠都显著性下调(P<0.05)。

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第一章 前言

第二章 材料与方法

2.1 材料和仪器

2.2 实验方法

第三章 结果

3.1 BALB/c小鼠RPE得分分布情况

3.2 脑不对称BALB/c小鼠血浆皮质酮分布

3.3 脑不对称BALB/c小鼠血浆TNF-α分布

3.4 BALB/c小鼠左右两侧大脑海马区和肝脏中GR mRNA 的表达水平

3.5 BALB/c小鼠左右两侧大脑海马区和肝脏中GR蛋白的表达水平

第四章 讨论

4.1脑不对称BALB/c小鼠RPE得分分布模式

4.2 脑不对称对BALB/c小鼠血浆CS水平的影响

4.3 脑不对称对小鼠血浆中TNF-α水平的影响

4.4 脑不对称对BALB/c小鼠GR影响

第五章结论

参考文献

致谢

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