STAT3信号通路参与激活Toll样受体3对皮肤成纤维细胞释放MMP和胶原蛋白的作用研究

摘要

皮肤损伤激活先天性和适应性免疫反应以恢复组织的完整性，在机体应对损伤反应中，Toll样家族发挥了至关重要的作用。TLRs是一组高度保守的模式识别受体(PRRs)，它能识别存在的各种病原体相关分子模式(PAMPs)，诱导细胞产生先天性和适应性免疫反应，构成机体的第一道防线。聚肌胞（P o ly I:C）是人工合成dsRNA，可以模拟病毒感染，通过触发模式识别受体（PRRs）如TLR3、维甲酸诱导基因（RIG-I）、黑色素瘤分化相关基因（MDA-5）引起宿主免疫应答。P o ly I:C通过激活PRRs触发信号转导级联反应，从而激活NF-ΚB和生产I型干扰素。在体内、外实验中，PolyI:C可加速伤口愈合，但其机制尚不是很清楚。
　　为了研究PolyI:C对伤口愈合的影响，我们分离培养了成人原代成纤维细胞。通过分析P o ly I:C作用于原代培养成纤维细胞后，细胞分泌MMP-9、P-STAT3及表达Collagen I的情况，利用明胶酶谱、PCR、免疫印迹等技术研究P o ly I:C对成纤维细胞的作用机制，探究PolyI:C对伤口愈合的影响。结果发现，PolyI:C刺激成纤维细胞分泌 M M P-9，表达P-S TAT3及 Collagen I，J A K/S TAT通路抑制剂 A G490可抑制M M P-9的基础分泌和P o ly I:C的促进作用。而利用Anti-IFN-Beta中和培养液中的干扰素-β后，细胞表达MMP-9、P-S TAT3及合成 Collagen I较单独应用P o ly I:C有所增加。这表明PolyI:C对成纤维细胞在伤口愈合过程中有双重作用，PolyI:C既可以通过 J A K/S TAT3途径促进原代培养真皮成纤维细胞表达 MMP-9、P-S TAT3及合成 Collagen I，又可以通过诱导干扰素-β来抑制上述作用，但综合起来是以促进作用为主的。
　　总之，我们证实PolyI:C有促进伤口愈合的作用，并且PolyI:C对伤口愈合的促进作用可能是通过影响P-STAT3水平、MMP-9的分泌以及胶原蛋白I的合成引起。

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第一章 前言

第二章 实验材料与方法

2.1 实验材料（主要仪器和试剂）

2.2 实验方法

第三章 实验结果

3.1 TLRs在原代培养HDFs的基础表达情况

3.2 TLR3受体激活剂聚肌胞在不同时间点、不同浓度条件下作用于原代培养HDFs释放MMP9的情况

3.3在不同浓度Anti-IFN-Beta作用原代培养HDFs24小时后释放MMP-9的情况

3.4 聚肌胞单独或者联合Anti-IFN-Beta、AG490作用于原代培养HDFs24小时后释放MMP-9活性情况

3.5聚肌胞单独或者联合Anti-IFN-Beta、AG490作用于原代培养 HDFs后MMP-9 mRNA的变化情况

3.6 聚肌胞单独或者联合Anti-IFN-Beta、AG490作用于原代培养HDFs 24小时后，P-STAT3的变化情况

3.7 聚肌胞单独或者联合Anti-IFN-Beta、AG490作用于原代培养HDFs24小时后Collagen I mRNA的变化

附图

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述

致谢

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