HTRA1启动子区甲基化与年龄相关性黄斑变性的相关性研究

摘要

目的：探索年龄相关性黄斑变性（age related macular degeneration, AMD）与HTRA1启动子区甲基化的相关性。
　　方法：本研究纳入的研究对象为在汕头国际眼科中心检查确诊的98例年龄相关性黄斑变性（AMD）患者和99例老年性白内障患者（Controls）。采集所有研究对象的外周静脉血，提取DNA并使用重亚硫酸盐处理后，进行多聚酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），将扩增的DNA进行测序鉴定基因型和定量甲基化比率（Methylation ratio）分析。我们定义SNP rs11200638位点为0号点，其上游可疑甲基化位点为-1号，其下游可疑甲基化位点为+1号（可疑甲基化位点是根据软件MethyPrimer检测确定）。使用卡方检验对等位基因和基因型频率分布进行比较，多元线性回归分析各个位点的甲基化比率相互关系， Logistic回归分析甲基化比率与AMD的相关性。
　　结果： SNP rs11200638等位基因的频率在 AMD组与对照组中的分布有差异(P=0.009, OR1.285,95％CI1.064-1.551)。-1、0、+1号位点的甲基化比率均与SNP rs11200638基因型相关（P=0.02、P<0.001、P=0.006）。在相同的rs11200638基因型中比较时发现，纯合子GG和AA中并未发现其他可能影响甲基化比率的因素，只有在杂合子AG中发现-1、0、+1位点的甲基化比率与AMD的发病有相关性（P<0.001、P=0.01、P=0.003）。多元线性回归还发现，在 AMD中0号位点的甲基化比率与+1号位点的甲基化比率有相关性(P=0.003)，在对照组中0号位点的甲基化比率与-1位点和+1位点的甲基化比率均有相关性(P<0.001, P<0.001)。逻辑回归分析同样验证了SNP rs11200638基因型与AMD发病的相关性(P=0.013)，并且还发现-1位点的甲基化比率与AMD的发病也存在相关性(P=0.005)。
　　结论：HTRA1启动子区甲基化比率的改变与AMD的发病具有相关性，且这种相关性与SNP rs11200638基因型具有密切的联系。

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第一章 引 言

1.1 年龄相关性黄斑变性的流行病学和一般临床特征

1.2 AMD发病分子机制的研究进展及存在问题

1.3 HTRA1的表观遗传调控及其在AMD发病中的潜在作用

1.4 本课题的研究内容

1.5 课题来源

第二章 研究对象与方法

2.1 研究对象

2.2 眼科临床检查方法

2.3 材料

2.4 实验操作方法

第三章 结果

3.1 研究对象的基本特征

3.2 病例组和对照组等位基因

3.3 可能影响各位点甲基化比率的相关因素分析

3.4 AMD和对照组中-1、0、+1位点甲基化比率相关性分析

3.5 在相同基因型中比较AMD和对照组-1、0、+1位点甲基化情况

3.6 logistic 回归分析结果

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

附录一 知情同意书

附录二符号表（缩略语）

附录三原始数据

后记