SDF-1/CXCR4/ROCK2信号通路介导全反式维甲酸抑制软骨形成的作用

摘要

目的：
　　研究全反式维甲酸（ATRA）对大鼠后肢芽间充质细胞软骨形成的抑制作用，并探讨其相关的分子机制。
　　方法：
　　乳酸脱氢酶（LDH）法检测ATRA对大鼠后肢芽间充质细胞的毒性作用，CCK8检测ATRA对大鼠后肢芽间充质细胞增殖和聚集的作用，免疫组织化学检测ATRA对其诱导构建的CCF胎鼠模型胫骨中软骨形成特异性因子SOX9和COL2A1表达的影响， qRT-PCR和Western blotting检测 ATRA对 SOX9和 COL2A1，以及 ROCK2基因、SDF-1和其受体CXCR4表达的影响。
　　结果：
　　体内实验中，ATRA诱导的CCF胎鼠模型胫骨SOX9和COL2A1表达量比对照组显著减少。体外实验中， ATRA对大鼠后肢芽间充质细胞的增殖具有剂量依赖性抑制作用。qRT-PCR结果显示， ATRA剂量依赖性抑制SOX9和COL2A1的mRNA转录水平。同样的， Western blotting结果显示，ATRA呈剂量依赖性下调SOX9和COL2A1的蛋白表达水平。相反的，ATRA显著上调ROCK2，SDF-1，CXCR4的mRNA转录水平和蛋白水平,且具有剂量依赖性。为了进一步研究 ATRA抑制大鼠后肢软骨发育的分子机制，我们分别应用RhoA/ROCK2信号通路和SDF-1/CXCR4信号通路的阻滞剂Y27632和AMD3100，二者使ATRA抑制的SOX9和COL2A1表达量显著增加。此外，我们发现应用AMD3100阻滞SDF-1/CXCR4信号通路，ATRA上调的ROCK2表达水平显著下降。
　　结论：
　　在大鼠后肢芽间充质细胞中，ATRA通过上调RhoA/ROCK2信号通路，抑制软骨形成，而ROCK2信号受到SDF-1/CXCR4信号通路的调控，共同作用于软骨特异性因子SOX9和COL2A1，从而抑制软骨发育。总而言之，ATRA通过介导SDF-1/CXCR4/ROCK2信号通路下调SOX9和COL2A1的表达，抑制软骨形成，进一步诱导形成CCF。

目录

声明

英文缩写词

前言

第一章 ATRA抑制大鼠后肢芽间充质细胞增殖和软骨形成

1.1 引言

1.2 材料与方法

1.3 结果

1.4 讨论

1.5 结论

第二章 ATRA 通过上调SDF-1/CXCR4/ROCK2信号通路抑制软骨形成

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.3 结果

2.4 讨论

2.5 结论

总结

参考文献

部分实验试剂配制

个人情况简介

致谢