猪肉和冻鱼片中45种兽药残留同时检测方法的研究

摘要

兽药残留（Veterinary drug residue），是指食品动物在使用了兽药后，蓄积或储存在动物细胞、组织或器官内等中的药物原型、有毒性的代谢物或杂质。兽药能有效的预防和治疗动物疾病、提高养殖效率等。喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、磺胺增效剂、β-受体激动剂、林可胺类和硝基咪唑类等化合物目前在动物源性食品养殖方面使用较多，但是滥用这些药物易造成产品的严重污染，通过食物链可在人体内蓄积，并且这些药物具有导致过敏反应和使人体产生抗药性等副作用。因此，监测多种兽药的残留对保证动物源性食品的安全具有积极意义。
　　本文以猪肉和冻鱼片为研究对象，研究并建立了样品中兽药多残留的同时检测方法，包括喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类和β-受体激动剂4类45种兽药。将固相萃取与 LC-MS/MS结合，考察样品萃取三种不同的溶剂，并选择最优溶剂80:20乙睛/水溶液和0.2％甲酸的80:20乙睛/水溶液对检测方法在回收率、相对标准偏差、检出限、定量限和方法不确定度进行分析。在5~100μg/kg或0.5~10μg/kg范围内，45种兽药的质量浓度与检测结果均呈良好的线性，相关系数 R2均大于0.99。喹诺酮类、磺胺类和大环内脂类兽药方法检出限为：0.34~4.59μg/kg；方法定量限为,1.12~15.31μg/kg。β-受体激动剂兽药的方法检出限为：0.15~0.48μg/kg；方法定量限为：0.49~1.49μg/kg。四类兽药的回收率在42.2~130.5%；相对标准偏差为：0.7~41.1%。满足要求，可作为实验室初筛的一种方法。对本方法的不确定度来源进行了探讨和评估，可以找出实验过程中对不确定度影响较大的因素，从而采取措施将影响降低，提高检查结果的可信度。

目录

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第一章 绪论

1.1兽药的概述

1.1.1大环内酯类药物的基本信息

1.1.2喹诺酮类药物的基本信息

1.1.3 β-受体激动剂类药物的基本信息

1.1.4磺胺类药物的基本信息

1.2兽药残留

1.2.1兽药残留的危害

1.2.2法律法规

1.3兽药残留分析检测方法

1.3.1气相色谱法（GC法）

1.3.2高效液相色谱法（HPLC法）

1.3.3高效薄层色谱（HPTLC）

1.3.4毛细管区域电泳（CZE）

1.3.5 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）

1.3.6液相色谱-质谱/质谱联用技术(LC-MS/MS）

1.4兽药残留的前处理技术

1.4.1液-液萃取法（LLE）

1.4.2超临界流体萃取法（SFE）

1.4.3固相微萃取（SPME）

1.4.4微波辅助萃取（MAE）

1.4.5固相萃取（SPE）

1.5本实验的研究目的

1.5.1立题背景

1.5.2主要研究内容

1.5.3研究的创新点

第二章材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验样品

2.1.2实验标准品

2.1.3主要试剂与材料

2.1.4 主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1样品前处理

2.2.2色谱-质谱条件

2.2.3液相色谱-串联质谱测定

第三章 结果与讨论

3.1样品提取的优化

3.1.1萃取溶剂和样品净化的选择

3.1.2猪肉样品提取的优化

3.1.3冻鱼片样品提取条件的优化

3.2方法学考察

3.2.1标准曲线的制作以及线性范围

3.2.2回收率和精密度

3.2.3方法检出限（LOD）和定量限（LOQ）

3.2.4不确定度分析：

第四章 方法实际应用

4.1测试

4.2测试结果

4.2.1猪肉和冻鱼片样品总离子流色谱图

4.2.2检测结果

第五章 结论

5.1结论

5.1.1建立检验方法

5.1.2检测样品

5.2实验的不足及展望

参考文献

致谢