利用茶碱诱导性RNA干扰开关定量研究lncRNA TINCR在膀胱癌的表达及功能

摘要

背景及目的：
　　膀胱癌是常见且复杂的恶性肿瘤，尽管近年膀胱癌预测及研究模型已经取得巨大进展，但为了进一步提高检测工具的特异性及可信性，更多全新的生物标记急需被补充。研究显示lncRNAs与多种癌症的发生发展密切相关，其中lncRNA TINCR是引导上皮细胞分化过程中重要的调节性非编码RNA，同时其被发现与消化道肿瘤发生发展相关，能够影响相关癌症恶性表型。因此本实验研究将探讨TINCR在膀胱癌组织及细胞的表达水平，分析其在膀胱癌细胞中的潜在功能。为了全面且准确地研究TINCR相关功能，我们利用合成生物学技术构建了茶碱诱导性RNA干扰开关系统，定量调控TINCR基因水平后验证起其在膀胱癌细胞的作用机制。从而进一步认识膀胱癌的分子网络，为膀胱癌精准医疗提供新的研究基础。
　　方法：
　　利用实时荧光定量PCR检测TINCR在49对膀胱癌组织样本及2个膀胱癌细胞系中的相对表达量，分析其与临床病理特征的关联。利用siRNA干扰技术下调膀胱癌细胞的TINCR表达水平后，分别检测细胞增殖和凋亡功能的改变。进一步通过茶碱诱导性RNA干扰开关系统调控膀胱癌细胞的TINCR表达水平，分别检测开关系统对细胞增殖和凋亡功能的改变。
　　结果：
　　膀胱癌组织中的TINCR表达水平高于癌旁组织（P=0.023），且其与肿瘤原发灶有关（P=0.035），同时膀胱癌细胞5637（P=0.026）及SW780（P<0.01）的TINCR表达水平高于永生化膀胱上皮细胞SV-HUC-1。si-TINCR能够有效下调TINCR表达水平，且能够抑制膀胱癌细胞的增殖并促进膀胱癌细胞的凋亡。茶碱诱导性 RNA干扰开关系统能够定量下调TINCR表达水平，并且利用开或关元件可“打开”或者“关闭”TINCR的下调引起的膀胱癌恶性表型改变。
　　结论：
　　LncRNA TINCR在膀胱癌中可能发挥着促癌基因的作用，利用茶碱诱导性RNA干扰开关系统能够定量调控TINCR的表达水平，精确地验证其在膀胱癌的功能，充分说明TINCR或许能够作为膀胱癌治疗的新靶点。

目录

声明

缩略语及符号集

第一章 前言

1 膀胱癌概述

2 长链非编码 RNA概述

3 合成生物学概述

第二章 实验材料与方法

1 实验材料

1.1 实验主要试剂、器材和设备

1.2 膀胱癌组织标本

1.3 膀胱癌细胞系

2 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 组织及细胞中总RNA的提取

2.3 cDNA的合成

2.4 实时定量PCR

2.5 siRNA 的合成

2.6 茶碱诱导性RNA干扰开关系统载体构建

2.7 质粒转化

2.8 目的质粒扩增和提取目的质粒

2.9 细胞转染

2.10细胞增殖检测实验

2.11细胞凋亡检测实验

2.12统计学分析

第三章 结果

1 TINCR在膀胱癌中的表达及功能

1.1 TINCR在膀胱癌组织表达水平及其与临床病理特征的关系

1.2 TINCR在膀胱癌细胞的表达水平

1.3 下调TINCR表达水平的检测

1.4 下调TINCR对膀胱癌细胞增殖的影响

1.5 下调TINCR对膀胱癌细胞凋亡的影响

2 茶碱诱导性RNA干扰开关系统定量调控TINCR干预膀胱癌表型

2.1 茶碱诱导性RNA干扰开关系统的定量检测

2.2 茶碱诱导性 RNA 干扰关闭元件对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响

2.3 茶碱诱导性 RNA 干扰开启元件对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响

第四章 讨论与结论

1 讨论

2 结论

参考文献

附录1 综述:医学合成生物学在膀胱癌治疗领域的进展

附录2 论文发表情况

致谢