烟酸受体GPR109A在MIN6细胞上通过抑制Akt/mTOR信号通路产生抗炎作用

摘要

目的：
　　烟酸受体GPR109A在很多组织和细胞中都被证明有抗炎活性。发现小鼠胰岛β细胞及MIN6胰岛β细胞株表达烟酸受体GPR109A，并且证明在MIN6细胞上，通过激活GPR109A可以抑制IFN-γ和TNF-α诱导的细胞内NO累积，由此推测GPR109A在β细胞上同样也有抗炎活性。在这些研究基础上，本实验将利用棕榈酸对MIN6细胞进行炎症诱导后，观察 GPR109A的抗炎作用，并进一步探索它的抗炎机制。并在原代小鼠胰岛细胞上初步探讨是否存在着相同的抗炎机制。
　　方法：
　　培养MIN6细胞，通过RT-PCR及免疫细胞化学染色验证MIN6细胞上存在GPR109A的表达。分别予棕榈酸及棕榈酸+烟酸干预，蛋白免疫印迹法（western blotting）检测INF-γ及GPR109A的表达情况和Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化水平。为进一步验证GPR109A与Akt/mTOR信号通路的关系，分别予不同浓度的烟酸和3-羟基丁酸干预MIN6细胞，检测细胞内Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化水平。分离小鼠胰岛，予烟酸和3-羟基丁酸干预，荧光定量PCR分析mTOR、p70S6K的表达水平。
　　结果：
　　⑴MIN6细胞表达GPR109A mRNA。⑵MIN6细胞表达GPR109A蛋白。⑶烟酸可部分逆转棕榈酸诱导的MIN6细胞Akt和p70S6K的磷酸化和IFN-γ的表达。⑷烟酸抑制MIN6细胞内Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化。⑸3-羟基丁酸抑制MIN6细胞内Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化。⑹烟酸、3-羟基丁酸可抑制小鼠胰岛细胞mTOR、p70S6KmRNA的表达。
　　结论：
　　在MIN6细胞上，烟酸受体GPR109A可以通过抑制Akt/mTOR信号通路来抑制棕榈酸诱导的炎症因子表达。

目录

声明

缩略词

第1章 前言

1.1研究背景

1.2本项研究课题的基金来源及相关课题情况

1.3本课题的研究意义

1.4研究目标与研究内容

第2章 材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计方法

第3章 实验结果

3.1 MIN6细胞表达GPR109A mRNA

3.2 MIN6细胞表达GPR109A蛋白

3.3 烟酸可部分逆转棕榈酸诱导的MIN6细胞Akt和p70S6K的磷酸化和IFN-γ的表达

3.4 烟酸抑制MIN6细胞内Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化

3.5 3-羟基丁酸抑制MIN6细胞内Akt、mTOR、p70S6K的磷酸化

3.6 烟酸或3-羟基丁酸可抑制小鼠胰岛细胞mTOR、p70S6K的转录

第4章 讨论

第5章 结论

参考文献

英文论著

致谢