牛肠碱性磷酸酶对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其机制探讨

摘要

目的： 本实验旨在通过建立大鼠全肝缺血再灌注损伤模型，测定肝脏缺血再灌注后血清中内毒素水平、细胞因子TNF-a、IL-6、IL-10水平、肝组织MPO水平及观察肝脏组织病理改变，从而探讨肝脏缺血再灌注损伤发生机制及牛肠碱性磷酸酶的保护作用机制。 方法： 将SD大鼠72只随机分为3组：(1)假手术组(S组)：n=24，大鼠只接受麻醉，开腹，游离肝周韧带，不阻断肝脏供血，分别于手术后1、3、6、12h收集血液及肝组织标本，每个时间点n=6；(2)生理盐水对照组(N组)：依Pringle's法建立肝脏缺血再灌注模型，阻断入肝血流20min，在再灌注前5min从尾静脉注射生理盐水1ml，收集标本时间点及各时间点动物数同S组；(3)牛肠碱性磷酸酶实验组(C组)：阻断入肝血流20min，在再灌注前5min从尾静脉注射牛肠碱性磷酸酶0.5u/g，其余同N组。于再灌注后1、3、6、12h各时间点再次入腹，经门静脉取血4ml，离心(4℃，3000r/min)10min后，取上清置于-80℃冰箱保存待测。接触血液标本的器皿均为一次性无热源器皿。取肝左叶用10％福尔马林固定，石蜡包埋待用，肝右叶快速置于液氮中保存待测。采用鲎试剂终点显色法检测血清内毒素水平；酶联免疫吸附实验法检测血清TNF-a、IL-6、IL-10水平；髓过氧化物酶法检测肝组织中性粒细胞浸润程度；HE染色法观察肝组织病理改变。 结果： (1)血清内毒素的水平变化：再灌注后S组血清内毒素水平在各时间点无显著变化(P>0.05)，N组及C组内毒素水平在再灌注后较S组明显升高，3h达高峰，在同一时间点C组血清内毒素水平显著低于N组(P<0.05)。(2)血清细胞因子的水平变化：再灌注后S组血清TNF-a、IL-6、IL-10水平变化在各时间点无统计学意义(P>0.05)，N组及C组TNF-a、IL-6水平均较S组显著升高(P<0.05)，TNF-a水平高峰出现在再灌注后3h，IL-6水平高峰出现在再灌注后6h，到再灌注12h，TNF-a、IL-6水平仍高于S组，在同一时间点C组TNF-a、IL-6水平显著低于N组(P<0.05)，N组IL-10水平在再灌注1h稍有升高，到再灌注6h达高峰后迅速下降，再灌注12h，N组IL-10水平与S组没有显著性差异(P>0.05)，C组各时间点IL-10水平升高较N组明显，差别有统计学意义(P<0.05)。(3)肝组织MPO的水平变化：再灌注后S组肝组织MPO值各时间点无显著变化(P>0.05)，N组和C组肝组织MPO值再灌注后明显升高，6h达到最高，显著高于S组(P<0.05)，在同一时间点C组MPO值显著低于N组(P<0.05)。(4)肝组织病理学改变：S组肝小叶结构完整，肝细胞排列整齐，未见明显坏死和中性粒细胞浸润；N组肝细胞排列紊乱，肝小叶结构不完整，部分肝细胞索、肝窦分界不清，肝窦内见较多红细胞淤积，肝细胞明显水肿、脂肪变性，胞浆疏松化，呈气球样变性，可见核固缩及凋亡小体，炎症细胞浸润较多；C组肝细胞损伤较N组减轻，肝组织结构破坏较轻，肝小叶结构清晰，肝窦间隙见少量红细胞淤积，部分肝细胞肿胀呈气球样变，肝细胞坏死及炎症细胞浸润较N组减轻。 结论： 牛肠碱性磷酸酶能减少血清内毒素含量，抑制促炎细胞因子TNF-a、IL-6的释放并促进抗炎细胞因子IL-10的释放，减少中性粒细胞在肝组织的浸润活化，从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文缩略词对照表

声明

前言

一、材料与方法

1.主要实验材料

1.1主要试剂

1.2主要仪器

1.3实验动物

2.实验方法

2.1缺血再灌注模型制备

2.2实验分组

2.3标本采集

2.4检测项目及方法

3.统计学处理

二、结果

1.血清内毒素的水平变化

2.血清TNF-α、IL-6的水平变化

3.血清IL-10的水平变化

4.肝组织MPO的水平变化

5.组织病理学改变

附图

三、讨论

1.肝脏缺血再灌注损伤的过程及其相关机制

1.1肠源性内毒素易位

1.2 NF-κB激活

1.3细胞因子释放

1.4中性粒细胞浸润

2.CIAP对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制

2.1内毒素耐受

2.2 CIAP与单磷酸类脂A

四、结论

参考文献

附录 肝脏缺血灌注损伤发生机制研究进展

攻读学位期间发表论文

致谢

统计学审稿证明