VEGF单核苷酸多态性、sFlt-1、PIGF与子痫前期的相关性研究

摘要

目的:妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的疾病,以高血压、蛋白尿为主要症状,严重时出现抽搐、昏迷,甚至母婴死亡。我国的发病率为9.4％,国外报道7％～12％,其中子痫前期是疾病的严重阶段。目前无论是在发达的欧美国家还是在我国,重度子痫前期严重并发症导致的孕产妇死亡始终高居前3位内。是孕产妇和围生儿病率及死亡率的主要原因。有妊娠期高血压疾病史及家族史的妇女发病率明显高于无家族史者,说明遗传因素是妊娠期高血压疾病发病的原因之一。对子痫前期病因、发病机理的大量研究显示子痫前期是多因素疾病,环境与遗传因素在其发病中有重要作用。有学者提出一元化的学说:多基因的遗传背景使子痫前期的易感性增加、母胎界面免疫耐受、滋养细胞缺血缺氧、局部出现氧化应激、脂质过氧化,导致血管内皮细胞损伤,最终引发子痫前期的发生。胎盘缺血、缺氧、血管内皮损伤学说被广泛接受。该学说认为妊娠期高血压疾病分为两个阶段,首先以滋养细胞侵入过浅为特点,导致胎盘浅着床,此阶段无临床表现；其次胎盘缺血缺氧,释放的可溶性因子进入母体循环,引起内皮系统功能受损而出现血压升高和蛋白尿等症状。子痫前期患者血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PIGF)、可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)表达异常,可能在子痫前期内皮细胞损伤中起了重要作用。国外已有研究表明,VEGF、PIGF、sFlt-1可能参与了子痫前期的发生及发展[2],并且能作为预测诊断子痫前期的指标。本课题选择PIGF以及拮抗P1GF生物学功能的可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)为研究指标,检测子痫前期患者血清中PlGF和sFlt-1水平,探讨胎盘生长因子及其受体与子痫前期发病的关系及其相关性以及PlGF、sFlt-1/PlGF在子痫前期中的诊断价值。初步探讨在汉族孕妇中VEGF+936C/T位点、-634G/C位点单核苷酸多态性与子痫前期的相关性,寻找子痫前期的易感基因,以期寻找子痫前期的发病原因。
　　 方法:
　　 1.选取2009年2月～2010年4月在深圳市妇幼保健院住院分娩的妊娠妇女53例,其中子痫前期轻度15例、子痫前期重度患者21例,和17例与之年龄、孕周相匹配的血压正常无妊娠合并症及并发症的孕晚期孕妇(对照组),以上均为单胎妊娠。子痫前期诊断标准参照卫生部规划,全国高等学校教材妇产科学第7版[1]另选取2010年2月～2010年12月在深圳市妇幼保健院住院分娩的汉族妊娠妇女105例,其中(104例有VEGF+936PCR产物)子痫前期患者43例,和61例与之年龄、孕周相匹配的血压正常无妊娠合并症及并发症的孕晚期孕妇(对照组)；104例有VEGF-634 PCR产物,子痫前期患者42例,和62正常孕晚期孕妇,均为单胎妊娠。
　　 2.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测子痫前期患者及正常妊娠孕妇血清中sFlt-1和PIGF水平；应用双脱氧链末端终止法进行DNA测序,在基因水平上研究VEGF单核苷酸多态性对子痫前期影响,比较子痫前期患者和正常妊娠孕妇VEGF+936C/T,-634G/C位点单核苷酸多态性分布的异同,是否与子痫前期的发病有关,以期寻找子痫前期的发病原因。
　　 结果:
　　 1.正常妊娠对照组血清中sFlt-1水平为(2761.20±2119.42)ng/L,轻度子痫前期组血清中sFlt-1水平为(3854.47±3013.44)ng/L,重度子痫前期组为(6780.63±6303.86)ng/L,子痫前期组患者血清sFlt-1水平较正常妊娠对照组显著升高(P<0.05),随着子痫前期的病情加重血清sFlt-1逐渐上升,重度子痫前期组>轻度子痫前期组>正常妊娠对照组(F=3.877,P=0.032)。
　　 2.正常妊娠对照组血清中PIGF为(147.55±86.66)ng/L,轻度子痫前期组血清中PlGF水平为(62.41±38.86)ng/L,重度子痫前期组为(35.91±24.28)ng/L。子痫前期组患者血清PlGF水平较正常妊娠对照组显著降低(P<0.05)。随着子痫前期的病情加重血清PlGF逐渐降低,重度子痫前期组<轻度子痫前期组<正常妊娠对照组(F=14.433,P=0.000)。
　　 3.sFlt-1/PlGF子痫前期患者显著高于正常妊娠对照组,随着病情加重逐渐上升,重度子痫前期组>轻度子痫前期组>正常妊娠对照组(F=8.404,P=0.002)。
　　 4.sFlt-1、PlGF、sFlt-1/PlGF、血清尿酸的受试者工作特征曲线。sFlt-1、PlGF、sFlt-1/PlGF、血清尿酸、白蛋白、β2微球蛋白曲线下的面积分别为0.65,0.913,0.9080.788、0.769和0.746。以PlGF曲线下面积为最大且有统计学意义,诊断价值较血清尿酸高。PlGF、sFlt-1/PlGF、血清尿酸、白蛋白、β2微球蛋白诊断子痫前期有显著性意义。同时PlGF在截断值等于107.25ng/L时,敏感度是91.7％,特异度82.4％；sFlt-1/PlGF在截断值等于19.47时,敏感度是80.6％,特异度82.4％。
　　 5.子痫前期组VEGF+936基因型分布频率对照组比较差异具有统计学意义((X2=5.459,P=0.043),子痫前期组VEGF+936 CT和TT基因型频率48.8％,4.7％高于对照组29.5％,1.6％,而CC基因型46.5％则低于对照组68.9％；同样子痫前期组VEGF基因+936等位基因C低于对照组(70.9％vs83.6％)而T等位基因高于对照组(29.1％vs19.4％),差异具有统计学意义(X2=4.781,P=0.029)。子痫前期组基因型CT+TT高于对照组(53.5％vs31.1％),CC型低于对照组(46.5％vs68.9％)差异具有统计学意义(X2=5.229,P=0.022)；
　　 6.用优势比OR计算VEGF+936基因在子痫前期患病中的相对危险度,发现子痫前期组基因型CT+TT/CC和等位基因T/C的OR值及95％可信区间分别为OR=2.542,95％CI(1.133,5.703)；OR=2.09,95％CI(1.072,4.077)。携带T等位基因发生子痫前期的风险为C等位基因风险的2.09倍。
　　 7.子痫前期VEGF基因-634基因型分布频率对照组比较差异无统计学意义(X2=2.451,P=0.329),子痫前期组VEGF基因-634 GC和CC基因型频率分别为31.0％,11.9％,高于对照组25.8％,4.8％；而GG基因型频率57.1％则低于对照组69.4％；差异无统计学意义。同样子痫前期组VEGF基因-634等位基因G频率73％低于对照组82％,而C等位基因频率27％高于对照组18％,差异无统计学意义(X2=2.744,P=0.098P)。
　　 结论:
　　 1.血清sFlt-1水平在子痫前期组患者血清与正常妊娠孕妇相比,呈高表达,随着子痫前期病情的加重,患者血清sFlt-1水平呈上升趋势sFlt-1在子痫前期的发生、发展可能起促进作用。
　　 2.血清PlGF水平在子痫前期患者血清与正常妊娠孕妇相比,显著降低,随着子痫前期病情的加重,患者血清PlGF水平呈下降趋势,PlGF可能与子痫前期的发生有关。
　　 3.sFlt-1/PlGF子痫前期组高于正常妊娠对照组,sFlt-1/PlGF调节失衡可能参与了子痫前期的发病过程。
　　 4.血清中PlGF、sFlt-1/PlGF具有很好的诊断价值,且用于判断子痫前期病情时特异度、敏感度更高于血清尿酸。
　　 5.血清PlGF≤107.25ng/L；sFlt-1/PlGF≥19.47时具有子痫前期的诊断意义。
　　 6.VEGF+936基因多态性与子痫前期具有相关性,VEGF+936基因多态性可能是子痫前期的易感基因。
　　 7.VEGF+936单核苷酸多态性对子痫前期的发生产生影响,VEGF+936位点CC基因型及等位基因C对子痫前期发病有保护作用。
　　 8.VEGF-634位点单核苷酸多态性与子痫前期无显著相关性。