子痫前期患者组织中晚期氧化蛋白产物水平测定及意义

摘要

研究背景
　　 子痫前期是妊娠期特发性疾病之一，在我国中发病率约为9.4％-10.4％。子痫前期疾病严重影响了母婴健康，是孕产妇和围产儿病率及死亡率的主要原因之一。子痫前期疾病以妊娠20周以后首次出现高血压、蛋白尿、水肿为特征，并可伴有全身多脏器的损害，病情严重的患者可能因抽搐、昏迷、脑出血、肺水肿、心功能衰竭、弥漫性血管内出血而导致死亡;子痫前期患者的胎儿生长受限、早产发生率远远高于正常妊娠妇女。子痫前期疾病的发病过程是多因素的，且目前该疾病的发病机制尚未明确。目前，临床上处理主要以对症治疗和终止妊娠为主。由于缺乏了有力的预测手段和防治手段，使该疾病成为导致孕产妇死亡的第二大原因，也是导致围生儿发病及死亡的主要原因之一。现多数学者认为子痫前期疾病发生、发展的原因可能与以下几种因素相关:异常滋养层细胞侵入子宫肌层、免疫损伤、血管内皮细胞损伤、遗传因素、营养缺乏及胰岛素抵抗等，而其中血管内皮细胞失功能与氧化应激又是密切相关的。现有部分研究表明氧化应激学说可能是子痫前期发病的主要机制之一。许多学者发现在子痫前期患者机体内氧化系统及抗氧化系统的平衡遭到了破坏，其中氧化作用增强，而抗氧化作用相对减弱，总平衡趋向于氧化方向增强，即使机体处于一种氧化应激状态。
　　 许多患者在子痫前期临床症状出现以前，胎盘的形态与功能方面的改变就已经出现了，并且临床上大部分子痫前期患者在胎盘娩出后其临床症状和临床体征很快消失，这些均表明了胎盘在子痫前期疾病的发生发展过程中可能起着关键性的作用。目前有许多学者认为子痫前期是一种胎盘源性疾病，其发病可能是起源于胎盘异常滋养层细胞侵入及胎盘氧化-抗氧化作用失衡，这些均可以导致炎性因子大量的释放，炎症介质参与内皮损伤，进一步引起了全身的血管内皮功能失调，导致血管收缩，致使终末器官血流灌注不足、血管渗透性增加，从而引起子痫前期患者的相关临床症状。
　　 氧化应激在许多与内皮功能受损相关的疾病中发挥着重要的作用。已有文献报道在子痫前期患者循环中脂质过氧化产物表达明显高于正常妊娠妇女。不可控制的过氧化可能导致了血管内皮细胞细胞膜脂质和其他的细胞组分的消融。氧化应激是以产生高浓度的活性氧族(ROS)为特征的。许多研究证实了脂质过氧化产物的增加和抗氧化系统功能的改变引起了子痫前期氧化应激的发生。子痫前期患者机体内自由基及活性氧族表达增高，与抗氧化体系之间失去平衡，使机体处于氧化应激状态。当然，在正常妊娠妇女体内也可以见到自由基产物，但由于正常妊娠妇女抗氧化能力相应提高，氧化与抗氧化系统之间仍处于平衡状态，并不致导致氧化应激的发生。机体内的蛋白质、多肽及氨基酸对各种自由基及其相关氧化物相当敏感。许多实验表明，在子痫前期患者中，氧化产物增多（如脂质过氧化物、蛋白氧化产物及核酸氧化产物等），而机体的抗氧化能力相对减弱，导致子痫前期患者体内呈现一种氧化应激状态。另外，由于子痫前期患者的胎盘缺血、缺氧可以导致大量的自由基生成、脂质、蛋白质过氧化、内皮细胞损伤等;这种过程在子痫前期疾病发生发展的过程中正反馈加重了氧化应激，导致了疾病进一步发展。目前的研究表明，蛋白质也是氧化应激攻击的主要靶分子之一，主要表现为氨基酸残基氧化、肽链断裂或者蛋白质分子的交联聚合、蛋白质的疏水性与对水解酶的抵抗性增强，从而使蛋白质丧失生物活性并易于累积。血管内皮细胞的损伤及功能失调是子痫前期疾病特征性病理变化之一，是子痫前期疾病多器官功能损伤的病理基础。
　　 晚期氧化蛋白产物(AOPP)是一种蛋白氧化应激的新型标志物，是氧化应激引起的体内各种蛋白质氧化后所形成的终末产物的总称。其是Witko-Sarsat等于1996年首次在慢性肾功能衰竭的患者血浆中分离出来的。近年来许多研究发现，AOPP是反映蛋白氧化程度较敏感且可靠的指标之一，其是含有双酪氨酸蛋白交联的产物，其主要成分为血清白蛋白被自由基或反应性氧系（主要为中性粒细胞髓过氧化酶产生的氯化氧化物）氧化后的产物。体外实验中发现AOPP可导致脐静脉内皮细胞损伤，产生大量炎症因子，进而加重了氧化应激的程度。在糖尿病、动脉粥样硬化、冠心病、慢性肠炎、尿毒症等疾病中发现AOPP表达水平均有所增高，这表示AOPP可能与这些疾病的发生发展具有相关性。HideakiKaneda等的研究表明慢性冠脉疾病与尿毒症中一样血浆白蛋白发生了氧化。慢性冠状动脉疾病患者血浆中的AOPP水平和尿毒症患者血浆中同样增高，并且AOPP水平相关于慢性冠状动脉疾病的发生及该病的严重程度。该实验证明氧化应激可能相关于慢性冠状动脉疾病的病理过程。AgnieszkaPiwowan等研究表明糖尿病是活性氧的产生及抗氧化系统功能失衡而导致的复杂代谢紊乱性疾病，其TRAP及SH水平均降低，而CO、NH2及AOPP的水平增高;AOPP的表达水平在Ⅱ型糖尿病中明显增高，其认为AOPP可能是一种评估糖尿病病人氧化应激介导的蛋白损伤的有用指标。AOPP不仅是氧化应激的产物，其还可以引起单核细胞中中性粒细胞的呼吸爆发，诱导了单核细胞产生更多的活性氧，正反馈诱导或加重了氧化应激反应，使机体呈现出一种持续氧化应激状态。
　　 目前，国内外对于正常孕妇及子痫前期患者循环中AOPP水平的研究尚少。未见有关于子痫前期患者脐带、胎盘组织中AOPP表达水平的相关研究报道。且国外文献所选取的入组患者因其饮食、习惯、环境、遗传等因素不同于国内患者，亦可能对两者间AOPP水平相关性有一定的影响性。本文通过观察、测定26例子痫前期患者（其中子痫前期轻度10例、子痫前期重度16例）与20例正常妊娠妇女脐带、胎盘组织中晚期氧化蛋白产物(Advancedoxidationproteinproducts，AOPP)的表达水平差异，探讨了AOPP与子痫前期患者氧化应激状态的相关性;并进一步探讨其在子痫前期疾病发生发展过程中的作用。
　　 研究目的
　　 通过测定晚期氧化蛋白产物(AOPP)在子痫前期患者和正常妊娠妇女脐带、胎盘组织中的表达水平差异，探讨AOPP与子痫前期疾病发生发展过程的相关性，探索AOPP在子痫前期发病机制中的作用，为进一步的研究氧化应激在子痫前期发病机制中的分子通路提供相关线索。
　　 研究方法
　　 1、运用免疫组化的方法检测子痫前期患者与正常妊娠妇女脐带中AOPP表达水平的是否有差异;
　　 2、运用免疫组化的方法检测子痫前期患者与正常妊娠妇女胎盘中AOPP表达水平的是否有差异;
　　 3、测定切片平均灰密度值，半定量脐带、胎盘中AOPP的表达量。
　　 4、统计采用SPSS13.0软件，所测数据以-X±S表示，组间比较采用独立样本T检验与One-wayANOVA(Levene's-检验，SNK-检验与Welch-检验)。P＜0.05时差异具有统计学意义。
　　 结果
　　 1、与对照组相比较，轻度子痫前期患者脐带组织中的AOPP表达水平明显增高，且差异具有显著性(p＜0.05);与对照组比较，重度子痫前期患者脐带组织中的AOPP表达水平明显增高，差异具有显著性(p＜0.05);重度子痫前期患者脐带组织中AOPP表达水平高于轻度患者脐带组织中的表达量(p＜0.05)。
　　 2、与对照组相比，轻度子痫前期患者胎盘组织中的AOPP表达水平明显增高，且差异具有显著性(p＜0.05);与对照组相比，重度子痫前期患者胎盘组织的中AOPP表达水平明显增高，差异具有显著性(P＜0.05);重度子痫前期患者胎盘组织中AOPP表达水平高于轻度患者胎盘组织中表达(p＜0.05)。
　　 结论
　　 1、子痫前期患者脐带组织中AOPP的表达水平与正常妊娠者脐带组织中的表达相比，具有明显差异性。
　　 2、子痫前期患者胎盘组织中AOPP的表达水平与正常妊娠者胎盘组织中的表达相比，具有明显差异性。
　　 3、AOPP在脐带、胎盘中的表达与子痫前期疾病的严重程度具有正相关性。
　　 4、这些实验结果提示，孕妇组织中AOPP的表达水平增高是子痫前期的重要病理变化，其可能源于子痫前期疾病，亦诱导加重了子痫前期的发生和发展，进一步说明子痫前期发生、发展过程有多种氧化因子共同参与，相互作用。

目录

摘要

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

研究展望

参考文献

综述

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成果

致谢

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