摘要
第一章 前言
1.1 研究背景
1.1.1 家蝇幼虫作为饲料添加剂的营养物质基础
1.1.2 饲料酶制剂在饲料添加剂中的应用
1.1.3 生物活性酶的酵母表面展示及其应用
1.2 研究目的
1.3 研究思路
第二章 蝇蛆常规营养成分分析及所含甲壳素的提取与制备
2.1 引言
2.2 实验材料
2.2.1 实验材料
2.2.2 主要试剂
2.1.3 主要仪器设备
2.1.4 主要试剂的配制
2.3 实验方法
2.3.1 蝇蛆粉和鱼粉的水分测定
2.3.2 蝇蛆粉和鱼粉的蛋白质含量测定
2.3.3 蝇蛆粉和鱼粉的脂肪含量测定
2.3.4 蝇蛆壳中甲壳素的提取
2.3.5 水溶性甲壳素的制备
2.3.6 数据统计与分析
2.4 实验结果
2.5 讨论
2.6 小结
第三章 家蝇蛆粉对鲫鱼的生长性能和非特异性免疫力的影响
3.1 引言
3.2 实验材料
3.2.1 试验鱼
3.2.2 主要试剂
3.2.3 主要仪器
3.2.4 主要试剂配制
3.3 实验方法
3.3.1 试验饲料的制备和鲫鱼养殖
3.3.2 生长指标测定
3.3.3 白细胞分类计数
3.3.4 红细胞和白细胞计数
3.3.5 中性粒细胞硝基四氮唑蓝还原试验
3.3.6 呼吸爆发试验
3.3.7 血清和肝胰脏的非特异性免疫功能测定
3.3.8 肠和肝胰脏消化酶活性测定
3.3.9 鲫鱼含肉率测定
3.3.10 肌肉常规营养成分测定(水分、蛋白质、脂肪)
3.3.11 数据统计与分析
3.4 实验结果
3.4.1 不同含量的家蝇蛆粉饲料对鲫鱼生长的影响
3.4.2 白细胞分类计数
3.4.3 红细胞和白细胞计数
3.4.4 中性粒细胞硝基四氮唑蓝还原试验
3.4.5 白细胞呼吸爆发试验
3.4.6 血清和肝胰脏非特异性免疫功能测定
3.4.7 肠和肝胰脏消化酶测定
3.4.8 含肉率测定
3.4.9 肌肉常规营养成分测定(水分、蛋白质、脂肪)
3.5 讨论
3.5.1.家蝇蛆粉替代鱼粉对鲫鱼生产性能及饲料效率的影响
3.5.2.家蝇蛆粉替代鱼粉对鲫鱼非特异性免疫和抗氧化能力的影响
3.5.3 家蝇蛆粉替代鱼粉研究中发现的一些问题和困扰
3.6 小结
第四章 粘质沙雷氏菌ChitinaseC的酿酒酵母细胞表面展示和活性鉴定
4.1 引言
4.2 实验材料
4.2.1 菌株、质粒和培养基
4.2.2 主要试剂
4.2.3 主要仪器设备
4.2.4 主要试剂的配制
4.3 实验方法
4.3.1 粘质沙雷氏菌ChiC基因的扩增
4.3.2 重组质粒pMD18-T/SMChiC的构建
4.3.3 酵母表面展示质粒pYD1-SMChiC的构建
4.3.4 酵母感受态细胞的制备和电转化
4.3.5 Aga2p-SMChiC融合蛋白的诱导表达与表面展示
4.3.6 酵母的免疫荧光染色
4.3.7 重组酶的纯化
4.3.8 表达产物的甲壳素降解活性的定性检测
4.3.9 表达产物的Western-blot鉴定
4.3.10 酵母全细胞的甲壳素降解活性的定量测定
4.3.11 诱导表达条件的优化
4.3.12 温度对全细胞酶活性的影响
4.3.13 纯化产物热稳定性的SDS-PAGE酶谱法检测
4.3.14 pH对全细胞酶活性的影响
4.4 实验结果
4.4.1 酵母表面展示载体pYD1-SMChiC的构建
4.4.2 SMChiC在酿酒酵母EBY100中的表面展示
4.4.3 重组酶的甲壳素降解活性的定性检测
4.4.4 展示酶的酵母全细胞的甲壳素水解活性定量测定
4.4.5 诱导表达条件的优化
4.4.6 温度对甲壳素酶展示酵母的甲壳素降解活性的影响
4.4.7 pH对全细胞酶活性的影响
4.5 讨论
4.6 小结
第五章 具有甲壳素降解活性的酵母酶对鲫鱼的生长性能和非特异性免疫力的影响
5.1 引言
5.2 实验材料
5.2.1 试验鱼
5.2.2 主要试剂
5.2.3 主要仪器
5.2.4 主要试剂配制
5.3 实验方法
5.3.1 试验饲料的制备和鲫鱼养殖
5.3.2 对生长的影响效果测定
5.3.3 白细胞分类计数
5.3.4 红细胞和白细胞计数
5.3.5 中性粒细胞硝基四氮唑蓝还原试验
5.3.6 呼吸爆发试验
5.3.7 血清和肝胰脏的非特异性免疫功能测定
5.3.8 肠和肝胰脏消化酶活性测定
5.3.9 鲫鱼含肉率测定
5.3.10 肌肉常规营养成分测定(水分、蛋白质、脂肪)
5.3.11 组织学观察
5.3.12 数据统计与分析
5.4 实验结果
5.4.1 不同酵母酶含量饲料对鲫鱼生长的影响
5.4.2 白细胞分类计数
5.4.3 红细胞和白细胞计数
5.4.4 中性粒细胞硝基四氮唑蓝还原试验
5.4.5 白细胞呼吸爆发试验
5.4.6 血清和肝胰脏非特异性免疫功能测定
5.4.7 肠和肝胰脏消化酶
5.4.8 含肉率测定
5.4.9 肌肉常规营养成分测定(蛋白质、脂肪、水分)
5.4.10 组织学观察
5.5 讨论
5.5.1 酵母酶对鲫鱼生产性能及饲料效率的影响
5.5.2 酶酵母对鲫鱼非特异性免疫和抗氧化能力的影响
5.6 小结
参考文献
全文总结
研究展望
文献综述 家蝇幼虫在动物营养与保健领域的应用
英文缩写词
载体图谱
成果
致谢
统计学审稿证明
声明