电针对2型糖尿病合并肾性高血压大鼠模型的疗效研究

摘要

目的:本研究通过持续电针刺激2型糖尿病合并肾性高血压模型大鼠的双侧足三里穴，来验证针灸对糖尿病合并肾性高血压病早期的治疗作用。实验首先建立2型糖尿病合并肾性高血压病大鼠复合模型，并通过一系列生理、病理、影像学结果对该模型进行评价，确定该模型的稳定性和可持续性;然后，给予复合模型大鼠持续的高频电针刺激后，观察大鼠血糖和血压以及肾素、血管紧张素Ⅱ、糖化血红蛋白值的改变，来判定电针对糖尿病合并肾性高血压病的治疗是否有效，并最终为临床上2型糖尿病合并肾性高血压病的临床治疗和防治提供新的实验及理论依据。
　　方法:第一部分 2型糖尿病合并肾性高血压病大鼠模型的制作及评价
　　首先，给予造模大鼠高脂高糖膳食，空白对照组大鼠给予普通膳食。4W后对造模大鼠进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)，待其形成胰岛素抵抗后，按STZ溶液28mg/kg剂量腹腔注射（冰浴避光下，将STZ溶于PH4.2-4.5的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，配置浓度为1％）。空白对照组大鼠注射等体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。2周后，连续3天均测得FBG≥7.8mmol/L或RBG≥16.7mmol/L，为2型糖尿病模型成模标准。
　　其次，将上述2型糖尿病成模大鼠随机分为糖尿病组（即糖尿病大鼠）、假手术组（即糖尿病开腹未手术的大鼠）、复合模型组（即糖尿病并肾动脉结扎手术的大鼠）。其中，复合模型组大鼠麻醉后固定，保持右侧卧位，消毒备皮后铺巾。在左侧肋弓下缘平行于脊柱约1cm处向下剪开约2.0cm左右切口，逐层剪开至腹腔，将生理盐水打湿后的纱布包裹裸露的肾脏。充分暴露肾脏及腹主动脉，同时确保肾蒂不能出现扭转，用棉签轻轻擦拭包裹肾动、静脉外侧的筋膜，然后在腹主动脉与肾动脉的分叉处用玻璃分针将肾动、静脉分开，剥离约0.5-1.0cm的长度，穿单线备用，把0.25mm直径的针灸针置于肾动脉一侧并与肾动脉平行，用3-0号缝合线结扎肾动脉后抽出针灸针，术后常规抗炎一周。假手术组除不结扎左肾动脉外，其余操作均同复合模型组。2周后，连续3天均测得大鼠SBP≥140mmHg，同时FBG≥7.8mmol/L或RB G≥16.7mmo l/L，确定为2型糖尿病合并肾性高血压模型。
　　最后运用生理学，生物化学，解剖学，病理学，影像学等多重指标对该模型进行评价。
　　第二部分 电针对2型糖尿病合并肾性高血压大鼠模型的疗效研究
　　将实验大鼠随机分成5组，分别为空白组，单纯糖尿病组，单纯肾性高血压组，复合模型未电针组，复合模型电针组（除复合模型的两组大鼠沿用第一部分造模的大鼠外，其余各组大鼠均重新获取、制备）。分别对各组大鼠予持续高频电针刺激后，检测大鼠的血糖、血压、糖化血红蛋白、肾素、血管紧张素、病理等变化，并记录各值。对比电针前后各组大鼠的生理、生化、病理等指标，评估电针对2型糖尿病合并肾性高血压病大鼠模型的疗效。
　　结果:第一部分 2型糖尿病合并肾性高血压病大鼠模型的制作及评价
　　1.一般行为观察
　　空白对照组大鼠，毛发顺滑干净有光泽，精神状态良好，体重随饲养周期变化明显增大;与空白对照组相比，其他三组大鼠采食、饮水及大小便均增多，体重增长较缓慢，部分出现体重减轻。与糖尿病组和假手术组大鼠相比，复合模型组大鼠精神较紧张，毛色缺少光泽，局部毛发变黄易脱落，抓持时遗尿排便现象较普遍，大便质软甚至稀便，腐臭味明显，尿量及粪量均增加。
　　2.大鼠体重变化
　　造模前各组大鼠体重无差异，当造模大鼠给予高脂高糖膳食后，其体重较普通膳食的空白对照组大鼠有明显增加，且具有统计学差异(P＜0.05)。STZ造模后，空白对照组大鼠体重继续增加，造模大鼠体重则逐渐降低，各组间差异显著，具有统计学意义(P＜0.05)。
　　3.OGTT，FBG及GHbA1c值的变化
　　大鼠OGTT的变化。结果显示:空白对照组大鼠0.5h、1h及2h血糖先升高后降低，2h后血糖降为正常值，造模大鼠血糖也是先升高后降低，2h血糖也降为正常，但造模大鼠不同时间点的血糖有差异，且具有统计学意义(P＜0.05)。大鼠FBG的变化。造模前及给予高脂高糖膳食4周后，两组大鼠空腹血糖均无明显差异(P＞0.05); STZ造模后，造模组血糖较空白对照组明显升高，两者之间有显著性差异(P＜0.01)。大鼠GHbA1c的变化。所有大鼠眼眶静脉采血后，分离血清，测定糖化血红蛋白浓度。造模大鼠较空白对照组大鼠糖化血红蛋白浓度值明显升高，具有统计学意义(P＜0.01)。
　　4.血压测量结果
　　与前三组相比，复合模型组大鼠收缩压和舒张压值明显升高，均有显著差异(P＜0.01);而空白对照组、糖尿病组及假手术组之间收缩压和舒张压均无明显差异，无统计学意义(P＞0.05)。
　　5.彩超检查
　　结果:编号A、B、C、D的肾脏大小分别为2.19×1.01cm，2.32×1.08cm，2.15×1.06cm和1.39×0.70cm;前三组的肾脏大小明显大于复合模型组，提示复合模型组大鼠肾动脉结扎后肾脏出现萎缩变小。编号E、F、G、H中PSV、EDV为血流速度，RI为血管阻力，前三组血流速度大于复合模型组，而血管阻力则小于复合模型组，提示复合模型组大鼠结扎肾动脉后，肾动脉血管直径变小，血流量减少。
　　6.血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)值比较
　　所有大鼠采血后测定Cr，BUN值。各组之间的肾功能(Cr、BUN)均无明显差异(P＞0.05)。
　　7.病理学观察
　　胰腺HE染色和左肾的HE染色。
　　第二部分 电针对2型糖尿病合并肾性高血压大鼠模型的疗效研究
　　1.一般行为观察
　　空白组及单纯肾性高血压大鼠，精神状态良好，毛发顺滑干净有光泽，体重随饲养时间而增大;与以上两组相比，其他三组大鼠采食、饮水及大小便均增多，体重增长较慢，甚至部分出现体重减轻;另外，复合模型未电针组大鼠与其他组大鼠相比，精神更紧张，毛色缺少光泽，局部毛发变黄易脱落，抓持时遗尿排便现象较普遍，大便质软甚至稀便，腐臭味明显，尿量及粪量均增加。电针干预后，复合模型电针组大鼠部分状态较差，同时伴两侧膝关节处淤血红肿，其余各组大鼠无明显异常。
　　2.大鼠FBG的变化
　　经重复测量资料的方差分析结果可得:不同组间的FBG值均有差异(P＜0.05)。经两两比较，电针干预1周后，单纯糖尿病组和复合模型电针组与电针干预前相比，两组大鼠空腹血糖均出现明显下降(P＜0.01);电针干预2周后，单纯糖尿病组和复合模型电针组大鼠与电针干预前相比，空腹血糖也出现了明显下降(P＜0.01)。空白组、单纯肾性高血压组及复合模型未电针组电针干预前后，大鼠空腹血糖值均无明显差异(P＞0.05)。
　　3.血压测量结果
　　经重复测量资料的方差分析结果可得:不同组间的血压值均有差异(P＜0.05)。经两两比较，电针干预1周后，单纯肾性高血压组和复合模型电针组大鼠与电针干预前相比，收缩压及舒张压均有显著差异(P＜0.01);而空白组、单纯糖尿病组及复合模型未电针组之间收缩压和舒张压均无明显差异，无统计学意义(P＞0.05)。
　　4.大鼠GHbA1c、PRA、AngⅡ值的变化
　　所有大鼠眼眶静脉采血后，分离血清。测定各组大鼠电针干预前、1周后及2周后的糖化血红蛋白(GHbA1c)、肾素(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度。经重复测量资料的方差分析结果可得:不同组间的GHbA1c、PRA、AngⅡ值均有差异(P＜0.05)。经两两比较，电针干预1周后，单纯糖尿病组和复合模型电针组与电针干预前相比，两组大鼠GHbA1c水平均出现明显下降，(P＜0.01);电针干预2周后，单纯糖尿病组和复合模型电针组大鼠与电针干预前相比，GHbA1c水平也出现了明显下降，(P＜0.01);另外，电针干预1周后，单纯肾性高血压组和复合模型电针组与电针干预前相比，两组大鼠PRA、AngⅡ水平也均出现明显下降，(P＜0.01);电针干预2周后，单纯糖尿病组和复合模型电针组大鼠与电针干预前相比，PRA、AngⅡ水平明显下降，(P＜0.01)。
　　5.尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)值比较
　　大鼠采血后分离血清，测定Cr，BUN值。各组之间的肾功能(BUN、Cr)均无明显差异(P＞0.05)。
　　6.病理学观察。胰腺HE染色和肾脏的HE染色。
　　结论:综上所述，本实验成功制备出了2型糖尿病合并肾性高血压病的大鼠模型，同时该模型还能较好的模拟出临床上该疾病的症状和体征。另外，实验还证实了针灸对2型糖尿病合并肾性高血压病早期具有较好的治疗作用，一定程度上抑制了2型糖尿病合并肾性高血压病的进展，并探讨了其可能存在的机制。

目录

摘要

前言

第一章 2型糖尿病合并肾性高血压模型的建立及评价

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

第二章 电针对2型糖尿病合并肾性高血压大鼠模型的疗效研究

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

总结

参考文献

攻读学位期间成果

附录

致谢

声明