6-姜烯酚通过NF-κB途径对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用机制研究

摘要

本文从以下几部分进行论述：
　　第一部分 6-姜烯酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺泡毛细血管通透性的影响
　　目的：
　　研究6-姜烯酚(6-shogoal，6-SH)对脂多糖(Lipopolysac-charide，LPS)诱导的急性肺损伤(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺泡毛细血管通透性的影响。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，随机分为6组(n=12)，LPS或NS滴入后6h，颈动脉放血处死动物。检测每组动物支气管肺泡灌洗液(BALF)中总细胞数，中性粒细胞百分比，白蛋白浓度，检测肺组织湿重与干重比(W/D)。实验数据用均数±标准差表示，实验组之间的比较采用Dunnet T检验，检验水准α=0.05，p≤0.05认为差异有统计学意义，数据处理采用SPSS17.0。
　　结果：
　　(1)BALF总细胞数:Dunnett方差分析显示，与NS相比，L组BALF总细胞数增多，差异有统计学意义(p＜0.01)，与L组相比，6-SH组和DEX组BALF中总细胞数降低(p＜0.01)。
　　(2)BALF中性粒细胞数百分比:与NS组比较，L组BALF中性粒细胞数百分比升高(p＜0.01);与L组比较，6-SH组和DEX组BALF中中性粒细胞数百分比降低(p＜0.01);
　　(3)BALF白蛋白浓度:与NS组比较，L组BALF白蛋白浓度升高(P＜0.01);与L组比较，6-SH组和DEX组BALF中白蛋白浓度降低(p＜0.01)，差异有显著性。
　　(4)W/D:与NS组比较，L组肺组织W/D升高(P＜0.01);与L组比较，6-SH组和DEX组W/D降低(P＜0.01)。
　　结论：
　　6-姜烯酚能够减轻LPS诱导的ALI，其部分机制可能与抑制中性粒细胞浸润、降低肺泡毛细血管通透性、减轻肺水肿有关，其效果与激素的抗炎作用相似。
　　第二部分 6-姜烯酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液炎症因子的影响
　　目的：
　　研究6-姜烯酚对脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导急性肺损伤(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺泡灌洗液炎症因子的影响。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，随机分为6组(n=12)，LPS或NS滴入后6h，颈动脉放血处死动物。每组动物检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、白细胞介素-6(IL-6)的浓度。实验数据用均数±标准差表示，实验组之间的比较采用Dunnet T检验，检验水准α=0.05，p≤0.05认为差异有统计学意义，数据处理采用SPSS17.0。
　　结果：
　　(1)TNF-a:与NS组比较，L组肺组织TNF-a浓度升高(P＜0.01);与L组相比，6-SH组和DEX组肺组织TNF-a浓度降低(P＜0.01)。
　　(2)IL-1β:与NS组比较，L组肺组织IL-1β浓度升高(P＜0.01);与L组相比，6-SH组和DEX组肺组织IL-1β浓度降低(P＜0.01)。
　　(3)IL-6:与NS组比较，L组肺组织IL-6浓度升高(P＜0.01);与L组相比，6-SH组和DEX组肺组织IL-6浓度降低(P＜0.01)。
　　结论：
　　6-姜烯酚能够抑制LPS诱导的ALI小鼠肺泡灌洗液中TNF-a、IL-1β、IL-6浓度，其肺保护作用可能与抑制炎症因子有关。
　　第三部分 6-姜烯酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理学变化的影响
　　目的：
　　研究6-姜烯酚对脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导的急性肺损伤(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理学变化的的影响。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，随机分为6组(n=12)，LPS或NS滴入后6h，颈动脉放血处死动物。取部分肺组织进行病理切片染色，其余肺组织用来检测肺组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)活性，实验数据用均数±标准差表示，实验组之间的比较采用Dunnet T检验，检验水准α=0.05，p≤0.05认为差异有统计学意义，数据处理采用SPSS17.0。
　　结果：
　　病理所见:生理盐水对照组表现为小鼠肺组织结构正常，细胞完整，肺泡腔清晰可见，肺泡间隔未见水肿及炎细胞浸润。L组出现的肺损伤改变明显:包括肺泡结构破坏、细胞破坏、肺泡壁严重水肿、肺间质部分增厚、肺泡腔渗出增多，大量炎性细胞浸润、血管充血、出血。6-SH组和DEX组，均有不同程度的肺损伤，但较L组损伤减轻，其肺泡组织结构尚可，肺间质和肺泡腔内渗出物较L组明显减少，炎性细胞浸润现象亦减轻。MPO:与NS组比较，L组肺组织MPO活性升高(P＜0.01);与L组相比，6-SH组和DEX组肺组织MPO活性降低(P＜0.01)。
　　结论：
　　1、组织病理学检查证实:6-姜烯酚能够改善病理状态下的肺组织，且成剂量依赖性。
　　2、6-姜烯酚的肺组织保护作用可能与抑制MPO活性相关。
　　第四部分 6-姜烯酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织NF-κB信号通路的抑制作用
　　目的：
　　研究6-姜烯酚对脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导的急性肺损伤(Acute Lung Injury, ALI)小鼠肺组织NF-κB信号通路的影响。
　　方法：
　　健康雄性小鼠72只，随机分为6组(n=12)，LPS或NS滴入后6h，颈动脉放血处死动物。取部分肺组织液氮保存，用Western Blotting检测肺组织NF-κB表达情况。实验数据用均数±标准差表示，实验组之间的比较采用Dunnet T检验，检验水准α=0.05，p≤0.05认为差异有统计学意义，数据处理采用SPSS17.0。
　　结果：
　　L组肺组织细胞核内NF-κB p65含量显著高于生理盐水对照组，差异有统计学意义(P＜0.01);与L组相比，6-SH干预组肺组织细胞核内NF-κB p65含量下降，差异有统计学意义(P＜0.01)。
　　结论：
　　6-姜烯酚的肺组织保护作用可能与抑制NF-κB表达相关。
　　第五部分 6-姜烯酚与NF-κB分子对接蛋白构象分析
　　目的：
　　利用分子对接技术，研究受体-配体间相互的作用，通过对6-姜烯酚与NF-κB分子对接蛋白构象分析，评价6-姜烯酚对NF-κB信号通路的影响。
　　方法：
　　使用Discoveray Studi02.5新一代分子建模和模拟环境软件，基于形状匹配的分子对接程序，采用模拟蒙特卡罗方法在LigandFit模块中将6-姜烯酚与NF-κB分子的活性位点进行柔性对接，观察配体结合取向、结合构象以及形状匹配等多种表现。整个过程分为9步:(1)载入受体蛋白文件。(2)定义受体，在受体中搜索结合位点。(3)运行对接流程分析对接结果。(4)优化对接poses。(5)配体对接pose的优化。(6)对优化后的对接poses重新打分。(7)分析优化后重新打分的配体pose。(8)运行一致性打分(Consensus Score)流程。(9)分析一致性打分结果。
　　结果：
　　6-SH与NF-κB的Lys145和Lys146氨基酸残基末端结合，并且与Lys145之间产生交互作用。同时，6-SH能够作用于深埋于NF-κB位于A链和B链之间的活性位点，它们是位于NF-κB p50 B链的深裂内层结构的氨基酸残基Tyr57，Va158，Cys59，Tyr143，Lys145，Lys146。最终一致性分析得分为41.27，配体内部的能量为-3.52。
　　结论：
　　6-姜烯酚通过与NF-κB活性位点结合，影响其调控的信号转导通路。

目录

摘要

前言

第一部分 6-姜烯酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺泡毛细血管通透性的影响

1 材料和方法

1．1 实验材料

1．2 方法

1．3 统计学处理

2 结果

2．1 BALF总细胞数

2．2 BALF中性粒细胞数百分比

2．3 BALF白蛋白浓度

2．4 肺湿／千重比(W／D)

3 讨论

4 结论

第二部分 6-姜烯酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液炎性因子的影响

1 材料和方法

1．1 实验材料

1．2 方法

1．3 统计学分析

2 结果

2．1 BALF中TNF-a浓度检测

2．2 BALF中IL-1β浓度检测

2．3 BALF中IL-6浓度检测

3 讨论

4 结论

第三部分 6-姜烯酚对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理学变化的影响

1 材料和方法

1．1 实验材料

1．2 方法

2 结果

2．1 肺组织病理学检查

2．2 各组肺组织MPO活性比较

3 讨论

4 结论

第四部分 6-姜烯酚对NF-kB信号通路的抑制作用

1 材料和方法

1．1 实验材料

1．2 方法

1．3 统计学分析

2 结果

3 讨论

4 结论

第五部分 6-姜烯酚与NF-κB分子对接蛋白构象分析

1 材料和方法

1．1 实验所需软件

1．2 所需功能模块

1．3 所需数据文件

1．4 所需时间

1．5 原理

1．6 具体对接步骤

2 结果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述 分子动力学模拟技术的研究新进展

展望

缩略词简表

博士研究生期间发表论文情况

参加国内国际会议

致谢

声明