6-姜烯酚通过抑制TLR4/NF-κB途径抑制VSMC迁移增殖

摘要

目的：
　　动脉粥样硬化是引起缺血性心脏病、脑卒中和外周血管病等高发病率和致死率疾病的首要原因，而血管内膜增厚则是动脉粥样硬化的一个重要特征和早期的关键病理过程，血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell，VSMC)位于血管壁的中膜，VSMC迁移到内膜并大量增殖是引起内膜增厚的主要原因，因此抑制VSMC迁移增殖是早期预防和治疗动脉粥样硬化的重要手段。
　　Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)是一种高度保守的膜蛋白，TLRs的主要作用是介导宿主的自身免疫。TLR4是TLRs家族的一员，它在人体的多种细胞都有表达，比如气道上皮细胞、巨噬细胞、心肌细胞、骨骼肌和血管平滑肌细胞等。有研究发现，TLR4介导的炎症反应在VSMC迁移增殖过程中，占据着重要地位，LPS，TLR4的激动剂，可以上调VSMC中TLR4表达，并诱导VSMC迁移、增殖，而使用E5564则可以明显抑制TLR4表达，并抑制VSMC的迁移和增殖。
　　6-姜烯酚（6-shogaol，6S）是干姜中活性很高的一种提取物。有研究发现，在胰腺癌中，6-姜烯酚可以抑制胰腺癌细胞的增殖与迁移，而其机制就是抑制TLR4/NF-κB通路的表达。在VSMC中，TLR4/NF-κB是VSMC迁移和增殖中的重要通路，因此我们推测，在动脉粥样硬化过程中，6-姜烯酚可以通过可抑制VSMC的迁移和增殖抑制动脉粥样硬化的发展，而其机制很可能与抑制TLR4介导的炎症反应有关。
　　为了证实以上的假设，我们使用6-姜烯酚对VSMC进行处理，然后观察其迁移以及增殖的情况，并检测TLR4的表达情况，以此来探讨6-姜烯酚在VSMC迁移与增殖过程中的可能作用。我们的实验分为以下几个部分:一:检测TLR4及其介导的炎症反应在VSMC迁移增殖中的作用;二:探索6-姜烯酚对VSMC迁移增殖的作用以及在这个过程中其对TLR4及其下游信号的影响;
　　方法：
　　1.使用组织块贴块法来培养野生型（Wild type，C57BL/6J背景）小鼠原代VSMC，用细胞免疫荧光染色法对VSMC进行鉴定。
　　2.采用Western Blot法检测蛋白TLR4、β-actin及NF-κB的表达。
　　3.用MMT法测定细胞增殖率，使用Transwell实验检测细胞迁移率。
　　结果：
　　1.原代培养出小鼠原代VSMC，免疫荧光鉴定。
　　2.PDGF和LPS均可激活TLR4并促进野生VSMC的迁移(P＜0.05)与增殖(P＜0.05)，TLR4基因敲除抑制PDGF和LPS诱导的VSMC迁移(P＜0.05)与增殖(P＜0.05)。
　　3.6-姜烯酚呈浓度依赖性地抑制PDGF诱导的VSMC的迁移(P＜0.05）与增殖(P＜0.05)。
　　4.6-姜烯酚下调VSMC中TLR4表达(P＜0.05)，6-姜烯酚下调VSMC中TLR4下游蛋白NF-κB的表达(P＜0.05)。
　　结论：
　　6-姜烯酚通过下调TLR4/NF-κB通路抑制血管平滑肌细胞迁移与增殖。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一章 前言

第二章 TLR4在VSMC迁移增殖中的作用

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 6-姜烯酚通过下调TLR4／NF-κB通路抑制血管平滑肌细胞迁移、增殖

3．1 材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

3．4 小结

全文结论

参考文献

文献综述 TLR4、6-姜烯酚与动脉粥样硬化

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢