护肝清脂片对FFA诱导的肝脂肪变性L02细胞的药理保护作用及蛋白质组学研究

摘要

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征，其包括单纯性脂肪肝(SFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝硬化。对该疾病机制研究显示其与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关。前期的研究结果显示，护肝清脂片作为一种中药复方，展现出了良好的降脂抗炎作用。然而，其对NAFLD的防治作用的相关机制还不是很明确。在本次研究中，我们首先验证检测了护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用。然后运用血清药理学与iTRAQ蛋白标记定量技术相结合的方法来阐明护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用机制。结果显示护肝清脂片能显著地改善游离脂肪酸导致的L02细胞中相关炎症因子、氧化应激以及脂质积累的影响。后续的的iTRAQ蛋白定量结果显示:游离脂肪酸单独刺激组与空白组比较，有355个蛋白表达发生改变，即鉴定到355个差异蛋白。同样地，护肝清脂药物血清高剂量组干预后与单独游离脂肪酸诱导组比较，有359个差异蛋白;护肝清脂药物血清高剂量组干预后与空白组比较，有365个差异蛋白。对所有差异蛋白的pathway分析结果显示有多条信号通路被注释到，比如:微生物在不同环境中的代谢(microbial metabolism in diverse environments)，脂肪酸代谢(fatty acidmetabolism)，过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路(peroxisome proliferatoractivated receptor signaling pathway)，丝裂原活化蛋白激酶信号通路(mitogen-activated protein kinase signaling pathway)等与护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用有关。此外，本次试验还对其中的一些差异蛋白包括heat shock protein27(HSP27)，acetyl-CoA acetyltransferase1，calnexin，and integrin-linked kinase进行了后续的Western blotting验证。最后运用特异性siRNA将HSP27沉默，检测了ROS、IL-6以及TNF-α水平，进一步揭示了HSP27蛋白在护肝清脂片药物血清对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用中所扮演的角色。以上所有结果证明护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞具有很好的保护作用，且该与上述蛋白的功能有关。

目录

摘要

前言

第一章 FFA诱导L02细胞脂肪变性模型的建立及护肝清脂片的药理保护作用

1．材料与试剂

2．实验方法

3．统计学分析

4．实验结果

5．讨论

6．结论

参考文献

第二章 基于iTRAQ技术下护肝清脂片药物血清干预FFA诱导的肝脂肪变性L02细胞模型的相关蛋白组学分析

1．材料与试剂

2．实验方法

3．统计学分析

4．实验结果

5．讨论

6．结论

参考文献

第三章 护肝清脂片药物血清干预FFA诱导的肝脂肪变性L02细胞模型相关差异蛋白表达的验证及机制探讨

1．材料与试剂

2．实验方法

3．统计分析

4．实验结果

5．讨论

6．结论

参考文献

全文总结

英文综述

附录

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致谢

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