非小细胞肺癌病人围术期三种循环肿瘤细胞及其上TAZ基因表达的检测

摘要

肺癌目前是引起全世界引起死亡所占比例最大的癌症，全球每年约有150余万人死于肺癌。近年来，虽然肺癌的手术治疗及放化疗治疗领域取得了一些进展，但肺癌的治愈率仍然令人失望，而且5年生存率也维持在比较低的水平，约为15％。肺癌根据组织学类型，可以分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌两种。其中，非小细胞肺癌约占肺癌总数的85％至90％，其中又分为肺鳞状上皮细胞癌（约占25％至30％）、肺腺癌（约占40％）及肺大细胞癌（又名肺未分化癌，约占10％至15％）。一般来说，这三种组织亚型非小细胞肺癌预后并无明显差异。
　　造成非小细胞肺癌预后不良的主要因素是远处转移，远处转移可以在非小细胞肺癌患者早期就发生。这就解释了为什么非小细胞肺癌患者在切除原发病灶后仍然会复发。关于肿瘤灶为什么在早期就可发生转移一直是一个有争论的话题。比较被学术界认可的观点是，肿瘤灶上的肿瘤细胞通过上皮-间质转化作用从较为稳定的上皮型肿瘤细胞转化为间质型肿瘤细胞，这一转化使得肿瘤细胞具有更强的侵袭性。这些肿瘤细胞入血形成循环肿瘤细胞，随着血液流动播散至全身各处形成局部肿瘤灶。
　　上皮-间质转化指的是上皮细胞经过一系列生物化学反应转化为间质表型细胞的过程，多种通路在这一进程中扮演重要作用。其中Hippo通路中的Hippo首次发现于果蝇遗传功能筛选实验中，Hippo是一条较为稳定的信号传导途径。最近几年研究发现，hippo通路的异常状态及其下游的TAZ基因的过度激活被认为有促上皮间质转化作用，在肿瘤发生发展进程中有重要作用。所以，我们拟通过检测非小细胞肺癌患者血中不同分型循环肿瘤细胞的数量及其上TAZ基因的表达，结合患者临床数据及手术操作的进行分析，为评估非小细胞肺癌患者病情和评价手术效果提供良好依据。
　　目的：
　　本研究首次采用广州益善生物技术股份有限公司开发的CanPatrolTM循环肿瘤细胞检测技术，通过RNA探针对收集的循环肿瘤细胞进行基因核酸定位，从而对收集到的细胞进行分型和鉴定。在鉴别过程中，创新性地加入了波形蛋白和扭曲蛋白的序列，使得可以完全分离出循环肿瘤细胞中的间质型细胞和双表型细胞。我们就可以分别计数不同的循环肿瘤细胞，联系临床病理数据对患者的病情进行评估。同样的，我们在捕获的循环肿瘤细胞上检测了与上皮间质转化有关的肿瘤基因TAZ的表达，根据不同临床病理学信息下TAZ基因阳性率的不同，来进一步评估患者的病情。
　　方法:
　　选择南方医科大学附属南方医院胸外科确诊可行手术根治性切除的非小细胞肺癌病人39例，分别于术前第一天和术后第五天分别抽取外周静脉血液5ml。后使用RNA探针技术检测循环肿瘤细胞的分型及其上TAZ基因的表达。
　　结果:
　　1.早期非小细胞肺癌患者血中即有循环肿瘤细胞，阳性率为89.5％。
　　2.上皮型循环肿瘤细胞随着非小细胞肺癌TNM分期的上升逐渐上升，结果有统计学意义(0.5vs.1.5vs.5.0，P=0.037)。
　　3.TAZ基因在EGFR野生型非小细胞肺癌患者的循环肿瘤细胞上的阳性率显著高于EGFR突变型非小细胞肺癌患者(49.1％vs.29.8％，P=0.047)。
　　4.TAZ基因的阳性率在纵隔淋巴结阳性(49.1％vs.29.8％，P=0.047)、高TNM分期(49.1％vs.29.8％，P=0.047)、CEA异常(60.0％vs.22.7％，P=0.014)和NSE(63.8％vs.47.0％，P=0.042)异常的非小细胞肺癌病人中更高。
　　5.根治性手术前后相比TAZ基因的阳性率有所下降。
　　6.我们使用在线工具(http://kmplot.com/analysis/)进行了对TAZ基因与非小细胞肺癌患者预后进行了Kaplan-Meier生存分析。结果显示，较高的TAZ表达与非小细胞肺癌患者的较差的总生存期(OS，P＜0.001)相关。
　　结论:
　　我们通过检测非小细胞肺癌患者不同分型循环肿瘤细胞数量及其上TAZ基因的表达，证明不同分型循环肿瘤细胞数量及其上TAZ基因的阳性率会随着患者的临床不同而不同，对监测临床治疗具有指导作用。

目录

摘要

第1章 背景

1．1 非小细胞肺癌疾病的概述

1．2 非小细胞肺癌的转移与上皮间质转化

1．3 循环肿瘤细胞及其检测方法

1．4 Hippo通路及其功能

第2章 方法

2．1 材料

2．2 方法

2．3 统计学分析

第3章 结果

3．1 患者概况

3．2 循环肿瘤细胞在非小细胞肺癌患者血液中的检测结果

3．3 TAZ基因在循环肿瘤细胞上的检测结果

3．4 手术对循环肿瘤细胞及其上TAZ基因阳性率的影响

第4章 讨论

4．1 非小细胞肺癌与循环肿瘤细胞检测

4．2 不同循环肿瘤细胞数量与临床数据的联系

4．3 循环肿瘤细胞上TAZ基因的阳性率与临床数据的关系

4．4 手术对循环肿瘤细胞及其上TAZ基因阳性率的影响

4．5 研究的不足之处

参考文献

中英文对照表

致谢

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