ADSCs联合雌激素对早发性卵巢功能不全患者调节性T细胞免疫调控作用的研究

摘要

目的：
　　近年来研究表明，早发性卵巢功能不全(POI)与自身免疫失调有关，表现为外周血调节性T细胞(Treg)降低。不同来源的间充质干细胞(MSCs)应用于化疗性POI动物模型时，均显示有改善诱导POI的作用，但应用于免疫诱导的POI的研究甚少。也有研究显示雌激素(17β-E2)有促进Treg增殖并增强其免疫抑制活性的作用。本实验探讨了脂肪间充质干细胞(ADSCs)联合17β-E2对POI患者Treg的免疫调控作用。
　　方法：
　　第一章：原代培养ADSCs并进行流式鉴定及成脂成骨诱导。密度梯度离心法分离健康人及POI患者的PBMCs。在植物凝集素(PHA)的刺激下，将PBMCs分别与不同浓度ADSCs及17β-E2共培养72h，检测淋巴细胞增殖率和Foxp3、TGF-β1、IFN-γ的mRNA水平以及Treg的比例。
　　第二章：选择第一章中促Treg增殖效果最佳的1×105ADSCs以及10-9mol/L17β-E2作为联合组，在PHA的刺激下将PBMCs分别与对照组、10-9mol/L17β-E2组、1×105ADSCs组、联合组共培养72h，检测Foxp3、TGF-β1、IFN-γ的mRNA水平以及Treg的比例。
　　结果：
　　第一章：原代培养的ADSCs纯度高，活性好，表型稳定，高表达CD29、CD44、CD105，低表达CD34、CD45、人白细胞DR抗原(HLA-DR)，具备成脂成骨分化能力。与对照组相比，不同浓度的ADSCs及17β-E2均能促进Treg的增殖，上调Foxp3、TGF-β1的表达，下调IFN-γ的表达。
　　第二章：与对照组相比，各实验组均能上调Foxp3、TGF-β1的mRNA水平，下调IFN-γ的mRNA水平，及促进Treg表达，其中联合组的效果最佳。
　　结论：
　　第一章：ADSCs及17β-E2均能发挥免疫调节作用，诱导调节性T细胞生成，其中1×105ADSCs和10-9mol/L17β-E2为最佳浓度。
　　第二章：ADSCs及雌激素可以通过促进Foxp3的表达、TGF-β1的分泌及抑制IFN-γ的分泌促进Treg增殖。ADSCs联合17β-E2能发挥协同作用，共同诱导Treg的免疫调节功能。

目录

摘要

前言

第一章 不同浓度的ADSCs和雌激素对外周血淋巴细胞及免疫相关因子表达的影响

一、目的

二、材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 统计学处理

三、结果

3．1 ADSCs的形态学观察

3．2 ADSCs的免疫表型及分化能力鉴定

3．3 ADSCs与雌激素分别对淋巴细胞增殖率的影响

3．4 ADSCs与雌激素分别对Foxp3、TGF-β1、IFN-γmRNA表达的影响

3．5 ADSCs与雌激素分别对调节性T细胞的影响

4．1 脂肪间充质干细胞的原代培养及鉴定

4．2 不同来源的间充质干细胞在POF／POI的应用

4．3 间充质干细胞的免疫调节作用

4．4 雌激素的免疫调节作用

五、结论

第二章 脂肪间充质干细胞联合雌激素对早发性卵巢功能不全患者调节性T细胞的免疫调控作用

一、目的

二、材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 统计学处理

三、结果

3．1 联合组对Foxp3、TGF-β1及IFN-γmRNA表达水平的影响

3．2 脂肪间充质干细胞联合雌激素对调节性T细胞的免疫调控作用

四、讨论

4．1 间充质千细胞、雌激素与调节性T细胞之间的相互作用

4．2 ADSCs和雌激素发挥免疫调节作用的可能机制

五、结论

全文小结

参考文献

中英文对照缩略词表

攻读学位期间成果

致谢

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