长链非编码RNa-SNHG7调控膀胱癌细胞的增殖、凋亡及侵袭性的研究

摘要

膀胱癌是发生在膀胱粘膜层的一种恶性肿瘤，它是泌尿系统疾病中最常见的恶性肿瘤之一，也是人类常见的十大肿瘤之一。约90％以上的膀胱癌患者为尿路上皮癌。膀胱鳞状细胞癌较少见，膀胱腺癌则更少见[1]。
　　膀胱癌以外科手术治疗为主，膀胱癌术后局部复发率高、容易进展和向远处转移，术后需长期随访复查，严重影响患者生活，成为临床治疗的难点。随着近几年肿瘤分子生物学技术的突飞猛进、分子诊断技术越来越多地运用于临床，传统的膀胱癌诊断方式已逐渐受到了挑战。目前，越来越多的膀胱癌基础研究已着眼于肿瘤基因及其编码产物的研究，其目的就是将其作为治疗的一个靶点进行干预，从而提高膀胱癌的治疗效果。但导致膀胱癌发生与进展的分子学机制目前尚未十分清楚[2]。
　　长链非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)是一类转录产物超过200个核苷酸，无蛋白编码功能，并由聚合酶Ⅱ转录生成[3]。到目前为止，有较多研究报道发现LncRNA在许多恶性肿瘤（如胃癌、肺癌、肠癌、前列腺癌等）细胞中异常表达，并且发现LncRNA跟肿瘤细胞的增殖、凋亡及侵袭性密切相关[4]。例如，Wong[5]等发现LncRNA-SNHG7在胃癌组织中高度表达，与胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭及转移密切相关。She[6]等研究发现LncRNA-SNHG7在肺癌组织中存在高表达，抑制LncRNA-SNHG7表达后可促进肺癌细胞的凋亡。
　　目前关于膀胱癌细胞中LncRNA-SNHG7的表达水平及作用机制的研究尚处于空白状态，本研究旨在研究膀胱癌组织及细胞株中LncRNA-SNHG7的表达水平;探讨LncRNA-SNHG7在调控膀胱癌细胞的生物学行为方面的作用;揭示LncRNA-SNHG7在膀胱癌细胞增殖、凋亡及侵袭过程中的影响，为膀胱癌的靶向治疗提供一个潜在的分子标记物及理论依据。
　　本研究主要分为以下三个部分:
　　第一部分:LncRNA-SNHG7在膀胱癌中的表达
　　目的:探讨膀胱组织中LncRNA-SNHG7的表达情况。
　　方法:收集87例膀胱癌组织标本作阳性组，癌旁正常膀胱组织（经病理检查确定）标本作对照组，通过RT-PCR检测膀胱癌组织中LncRNA-SNHG7的表达。采用SPSS19.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（(X)±s）表示，多样本均数比较采用方差分析，两样本均数比较采用t检验.计数资料以百分数(％)表示，采用卡方检验进行统计分析。P＜0.05认为差异有统计学意义。
　　结果:相对于正常尿路上皮组织，LncRNA-SNHG7在膀胱癌组织中呈高度表达。LncRNA-SNHG7的表达跟患者的性别、年龄无关，跟肿瘤的大小、肿瘤的分期及有无转移有关。其中，肿瘤越大(＞3cm)，LncRNA-SNHG7表达水平越高(P=0.000);在肌层浸润性尿路上皮癌中呈高表达的比例和表达水平高于非肌层浸润性尿路上皮癌(P=0.014);在有转移的膀胱癌中呈高表达的比例和表达水平高于无转移的膀胱癌(P=0.000)。
　　结论:LncRNA-SNHG7在膀胱在组织中呈高表达，且与肿瘤的大小、临床分期及肿瘤转移密切相关。
　　第二部分:LncRNA-SNHG7调控膀胱癌细胞的增殖、凋亡
　　目的:研究LncRNA-SNHG7在膀胱癌细胞中的表达情况，探讨LncRNA-SNHG7在膀胱癌细胞中对增殖及凋亡的影响。
　　方法:体外培养膀胱癌细胞株(SW780、J82、T24)及正常人膀胱细胞(SV-HUC-1);以小干扰RNA(siRNA)转染膀胱癌细胞及正常人膀胱细胞(SV-HUC-1)，分为si-LncRNA-SNHG7阳性组和si-NC阴性对照组;通过RT-PCR检测膀胱癌细胞中LncRNA-SNHG7的表达。通过CCK-8实验评估LncRNA-SNHG7在膀胱癌细胞增殖的影响作用。通过流式细胞技术评估LncRNA-SNHG7在膀胱癌细胞凋亡的影响作用。所有的实验结果重复3次，实验结果采用SPSS19.0软件进行统计分析。计量资料用均数±标准差（(X)±s）表示，组间两两比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05认为差异有统计学意义。
　　结果:与正常膀胱细胞相比，LncRNA-SNHG7在膀胱癌细胞中高度表达(p＜0.05)，如图1;膀胱癌细胞在siRNA转染后，细胞中LncRNA-SNHG7的表达明显下调(p＜0.05)，同时，膀胱癌细胞出现了增殖抑制，凋亡增加。
　　结论:该研究结果显示在膀胱癌细胞中LncRNA-SNHG7是高度表达的，siRNA可抑制LncRNA-SNHG7的表达;通过下调膀胱癌细胞LncRNA-SNHG7的表达，可以抑制膀胱癌细胞的增殖，促进膀胱癌细胞的凋亡。
　　第三部分:LncRNA-SNHG7调控膀胱癌细胞的侵袭性
　　目的:评估膀胱癌细胞中的LncRNA-SNHG7表达与膀胱癌细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的关系，探讨LncRNA-SNHG7对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。
　　方法:体外培养膀胱癌SW780及J82细胞系及正常人膀胱细胞(normal human bladder cell line，SV-HUC-1);以siRNA转染膀胱癌细胞及正常人膀胱细胞(SV-HUC-1)，通过Transwell检测膀胱癌细胞侵袭能力，免疫印迹技术(Western blot)检测上皮-间质转化(EMT)分子标志物E-cadherin、N-cadherin、vimentin和snail等蛋白的表达情况，评估LncRNA-SNHG7对膀胱癌细胞侵袭能力的影响作用。实验结果采用SPSS19.0软件进行统计分析。计量资料用均数±标准差((X)±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。P＜0.05认为差异有统计学意义。
　　结果:与正常对照组相比，siRNA转染后的膀胱癌细胞LncRNA-SNHG7表达下调，膀胱癌细胞的侵袭能力明显受到抑制(p＜0.05);LncRNA-SNHG7表达下调后诱导膀胱癌细胞EMT分子标志E-钙粘蛋白表达增加，而N-钙粘蛋白、波形蛋白以及Snail表达减少。
　　结论:下调膀胱癌细胞LncRNA-SNHG7的表达，可抑制膀胱癌细胞发生EMT进程，降低膀胱癌细胞的侵袭能力，在膀胱癌侵袭过程方面起着重要的调控作用。这提示LncRNA-SNHG7是一种促癌基因，可为将来膀胱肿瘤靶向治疗提供一个潜在的分子靶向标记。

目录

摘要

第一章 前言

第二章 LncRNA-SNHG7在膀胱癌中的表达

2．1 实验材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验方法

2．2 结果

2．2．1 LncRNA-SNHG7在膀胱癌中呈高表达

2．2．2 LncRNA．SNHG7的表达与临床资料的关系

2．3 结论

第三章 LncRNA-SNHG7调控膀胱癌细胞的增殖及凋亡

3．1 实验材料与方法

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验方法

3．1．3 统计学分析

3．2 结果

3．2．2 siRNA干扰膀胱癌细胞(Sw780、J82)后细胞中LncRNA-SNHG7的表达下调

3．2．3 下调LncRNA．SNHG7，能抑制膀胱癌细胞的增殖

3．2．4 下调LncRNA．SNHG7能促进膀胱癌细胞的凋亡

3．3 结论

第四章 LncRNA-SNHG7调控膀胱癌的侵袭能力

4．1 实验材料与方法

4．1．1 实验材料

4．1．2 实验方法

4．1．3 统计学分析

4．2 结果

4．2．2 LncRNA-SNHG7调控膀胱癌细胞上皮．间质化分子标志物表达

4．3 结论

第五章 讨论

全文总结

参考文献

综述

博士学位期间发表论文情况

致谢

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