PSRC1过表达调节胆固醇转运和炎症抑制小鼠动脉粥样硬化

摘要

背景与目的：
　　动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是所有ASCVD的共同病理生理学基础。流行病学研究显示，在多种种族的人群中，AS具有高度的可遗传性，这部分是由于很多的影响血脂水平的基因的突变导致。这些基因的功能不只能够影响血脂水平，也与泡沫细胞的形成甚至炎症反应有关。由此可见，针对这些基因的治疗可能是防治AS的有效方式。
　　PSRC1(Proline/serine-rich coiled-coil protein1)，即脯氨酸/丝氨酸丰富的卷曲螺旋蛋白1，又名DDA3，由PSRC1基因编码，是正常真核细胞有丝分裂进程的必要物质，在染色体向中间板聚集和有丝分裂后期染色体正常分离过程中都起着重要作用。通过GWAS研究发现PSRC1基因多态性与血清中TC、HDL-C、LDL-C和TG水平相关，这种相关关系在多种人群中均得到证实。由此可见，PSRC1与脂质代谢紊乱有关，并可通过影响血脂，影响AS的发生和发展。
　　我们的前期研究发现，使用血清淀粉样P物质(SAP)刺激小鼠巨噬细胞后，其胆固醇转出率明显升高，细胞内胆固醇含量减低，细胞泡沫化程度减弱。而通过基因测序发现，与对照组相比，SAP刺激组的PSRC1基因表达升高，沉默PSRC1基因后，可逆转SAP的抗巨噬细胞泡沫化的生物学效应。
　　综上所述，国内外和我们的前期研究均显示，PSRC1的表达可能与AS的发生发展有关。为了阐明此假说，本课题拟从体外和体内两个方面，通过腺病毒转染RAW264.7细胞，观察PSRC1过表达对于泡沫细胞形成的影响及机制;以及通过尾静脉注射腺病毒，使ApoE-/-小鼠全身PSRC1基因过表达后，观察对AS发生发展的影响及机制。
　　方法与结果：
　　一、体外研究
　　构建过表达PSRC1的腺病毒(Ad-PSRC1)以及对照腺病毒(Ad-GFP)，并转染RAW264.7细胞后，使用油红O染色、高效液相、Elisa法、RT-qPCR和Western Bolting等实验方法，阐明PSRC1过表达对RAW264.7细胞泡沫化、细胞内胆固醇、细胞胆固醇转出率以及胆固醇转运蛋白的表达的影响。
　　研究发现，①PSRC1过表达一方面可使RAW264.7细胞PPAR-γ和LXR-α的表达升高，②升高胆固醇转出率，③减少细胞内胆固醇的含量;另一方面，④可减低TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌，从而抑制细胞泡沫化。
　　二、体内研究
　　通过使用Ad-PSRC1和Ad-GFP尾静脉注射，构建PSRC1过表达的ApoE-/-小鼠模型，使用油红O染色、免疫组化、酶法、Elias法、RT-qPCR和Western Bolting等实验方法，阐明PSRC1过表达对小鼠AS发生发展以及体内巨噬细胞和肝细胞的胆固醇代谢以及炎症反应的影响。
　　研究发现，①PSRC1过表达抑制高脂饮食的ApoE-/-小鼠的AS的发生发展，增加AS斑块的稳定性。同时，一方面，②PSRC1过表达高脂饮食的ApoE-/-小鼠其血清TC/LDL-C/TG的水平降低，HDL-C水平升高，HDL的功能也被改善;另一方面，③血清TNF-α、IL-1β和IL-6的水平也降低。与体外研究结果类似，④肝脏和腹腔巨噬细胞的PSRC1过表达可上调PPAR-γ和LXR-α的表达。最后，我们的研究还发现，⑤肝脏和腹腔巨噬细胞的β-catenin的表达升高，NF-κB通路被抑制。
　　结论：
　　本研究证实，肝脏和巨噬细胞的PSRC1过表达，可通过增加β-catenin的表达，抑制NF-κB通路，进而上调PPAR-γ和LXR-α的表达，调节胆固醇代谢和抑制炎症，从而发挥抑制AS发生发展和增加斑块稳定性的作用。

目录

摘要

第一部分 研究背景

参考文献

第二部分 本研究技术路线

第三部分 实验方法和结果

一、病毒转染RAW264．7细胞后PSRC1过表达的情况

二、RAW264．7细胞PSRC1过表达抑制细胞泡沫化

三、腺病毒尾静脉注射转染动物效果

四、PSRC1过表达对ApoE-/-小鼠AS形成的影响

五、结论

五、PSRC1过表达对ApoE-/-小鼠AS斑块稳定性的影响

六、PSRC1过表达对于血脂的影响

七、PSRC1过衰送王对于炎症的影响

八、PsRC1过表达对于肝脏和腹腔巨噬细胞胆固醇转运蛋白的影响

九、PSRC1可上调β-catenin和抑制NF-κB

第四部分 讨论

参考文献

第五部分 全文总结

第六部分 本研究存在的局限性和后续设想

第七部分 攻读学位期间研究成果

致谢

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