摘要
前言
第一章ACGs对SCC15细胞增殖的影响
1．1实验材料
1．1．1主要实验材料
1．1．2主要试剂和仪器
1．1．3主要试剂的配制
1．2实验方法
1．2．1细胞培养和冻存
1．2．2细胞增殖检测(MTT法)
1．2．3细胞生长(形态)观察(普通光学显微镜)
1．2．4细胞凋亡检测(流式细胞术)
1．2．5细胞周期检测(流式细胞术)
1．2．7细胞迁移能力检测(划痕实验)
1．3实验结果
1．3．3 ACGs影响SCC15细胞的G2／M期的比例
1．3．4 ACGs抑制SCC15细胞的克隆形成
1．3．5 ACGs抑制SCC15细胞迁移
1．4讨论
第二章ACGs通过影响NSD1／EZHH2／Notch1表达抑制SCC15细胞增殖
2．1实验材料
2．1．1主要实验材料
2．1．2主要试剂和仪器
2．1．3主要试剂的配制
2．2实验方法
2．2．1 TCGA数据库分析NSD1、EZH2和Notch1在HNSCC中的突变和生存分析
2．2．2细胞总RNA的提取和逆转录
2．2．3 qRT-PCR检测NSD1、EZH2和Notch1 mRNA在口腔鳞癌细胞中的表达
2．2．4细胞总蛋白的制备
2．2．5 Western Blot
2．2．6 pOZ-EZH2和pOZ-N1ICD重组逆转录病毒质粒的构建
2．2．7病毒生产和稳定株的筛选
2．2．8 shRNA的转染及稳定株筛选
2．2．10流式细胞术检测上／下调NSD1、EZH2和Notch1对ACGs介导SCC15细胞凋亡的影响
2．2．12 Western Blot检测上／下调NSD1、EZH2和Notch1对SCC15细胞中蛋白表达的影响
2．2．13统计学分析
2．3实验结果
2．3．2 NSD1、EZH2和Notch1与HNSCC患者五年生存率分析
2．3．4 ACGs对SCC15细胞中NSD1、EZH2和Notch1表达的影响
2．3．5 shNSD1／SCC15稳定株细胞的构建
2．3．6 pOZ-EZH2和pOZ-N1ICD重组逆转录病毒质粒的构建及表达鉴定
2．3．7过表达EZH2和过表达N1ICD的SCC15细胞稳定株的鉴定
2．3．8下调NSD1对ACGs介导的SCC15细胞增殖抑制及EZH2和Notch1表达的影响
2．3．9过表达EZH2对ACGs介导的SCC15细胞增殖抑制及NSD1和Notch1表达的影响
2．3．10过表达Notch1对ACGs介导的SCC15细胞增殖抑制及NSD1和EZH2表达的影响
2．3．11 EZH2抑制剂对SCCl5细胞增殖及NSD1、EZH2和Notch1表达的影响
2．4讨论
第三章ACGs对SCC15细胞转录组水平的影响
3．1实验材料
3．1．1主要实验材料
3．1．2主要试剂和仪器
3．2实验方法
3．2．1细胞样本准备
3．2．2全转录组测序及生物信息分析
3．3实验结果
3．3．1基因表达水平和样本相关性分析
3．3．2差异表达基因数量
3．3．3差异基因GO功能富集分析
3．3．4差异基因KEGG通路富集分析
3．4讨论
参考文献
攻读硕士期间成果
致谢
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