摘要
前言
第1章Egr1和TGF-β1基因在临床HCC组织标本中表达
第1节实验材料及仪器
1．1实验材料
1．2主要试剂配制
1．3实验仪器
第2节实验方法及步骤
2．3实时荧光定量PCR(临床组织标本)
2．4免疫印迹法(临床组织标本)
2．5统计学方法
第3节实验结果
3．1人类蛋白质图谱中Egr1和TGF-β1在HCC的免疫组化染色
3．2临床HCC及癌旁的组织标本中Egr1和TGF-β1基因表达情况
讨论
第2章Egr1基因对HCC细胞增殖功能的影响
第1节实验材料及仪器
1．1实验材料
1．2主要试剂配制
1．3实验仪器
第2节实验方法及步骤
2．1细胞培养
2．2细胞计数与种板
2．3质粒扩增、提取及检测
2．4同步化处理与实验分组
2．5细胞转染
2．6实时荧光定量PCR(细胞)
2．7免疫印迹法(细胞)
2．8 CCK-8法测定细胞增殖
2．9统计学方法
第3节实验结果
3．1转染pENTER-Egr1质粒DNA的HepG2和Hep3B细胞中Egr1和TGF-β1的表达情况
3．2转染pENTER-Egr1质粒DNA的HepG2和Hep3B细胞增殖情况
3．3转染siEgr1的HepG2和Hep3B细胞中Egr1和TGF-β1基因的表达情况
3．4转染siEgr1沉默Egr1表达的HepG2和Hep3B细胞增殖情况
讨论
第3章HCC细胞中Egr1基因对TGF-β1／Smad信号通路的调控作用
第1节实验材料及仪器
1．1实验材料
1．2主要试剂配制
第2节实验方法及步骤
2．1细胞培养
2．2细胞计数与种板
2．3质粒扩增、提取及检测
2．4同步化处理与实验分组
2．5细胞转染
2．6免疫印迹法(细胞)
2．7统计学方法
第3节实验结果
3．2 HCC细胞沉默Egr1的表达对TGF-β1／Smad信号通路的影响
讨论
第4章HCC细胞中miR-181a-5p靶向抑制Egr1基因的表达
第1节实验材料及仪器
1．1实验材料
1．2主要试剂配制
1．3实验仪器
第2节实验方法及步骤
2．2细胞培养
2．3细胞计数与种板
2．4同步化处理与实验分组
2．5实时荧光定量PCR
2．6双荧光素酶报告基因
2．7统计学方法
第3节实验结果
3．1 MiRNA的筛选
3．2临床HCC组织标本miR-181a-5p的表达及与Egr1基因表达的相关性分析
3．3 Egr1基因3'UTR载体的构建
3．4双萤光素酶报告基因检测
讨论
第5章MiR-181a-5p抑制Egr1／TGF-β信号通路延缓HCC细胞增殖的研究
第1节实验材料及仪器
1．1实验材料
1．2主要试剂配制
1．3实验仪器
第2节实验方法及步骤
2．1细胞培养
2．2细胞计数与种板
2．3同步化处理与实验分组
2．4细胞转染
2．5实时荧光定量PCR(细胞)
2．6免疫印迹法(细胞)
2．7 CCK-8法测定细胞增殖
2．8统计学方法
第3节实验结果
3．1 HCC细胞中miR-181a-5p表达下调对Egr1、TGF-β基因的表达的影响
3．2 HCC细胞转染miR-181a-5p inhibitor对细胞增殖功能的影响
3．3 HCC细胞miR-181a-5p表达上调对Egr1、TGF-β基因的表达的影响
3．4 HCC细胞转染miR-181a-5p mimics对细胞增殖功能的影响
讨论
第6章MiR-181a-5p靶向调节Egr1基因的表达介导HCC细胞增殖的研究
第1节实验材料及仪器
1．1实验材料
1．2主要试剂配制
1．3实验仪器
第2节实验方法及步骤
2．1细胞培养
2．2细胞计数与种板
2．3同步化处理与实验分组
2．4细胞转染
2．5实时荧光定量PCR(细胞)
2．6免疫印迹法(细胞)
2．7 CCK-8法测定细胞增殖
2．8统计学方法
第3节实验结果
3．1 MiR-181a-5p inhibitor与siEgr1共转后对HepG2和Hep3B细胞Egr1、TGF-β1基因表达的影响
3．2 SiEgr1与miR-181a-5p inhibitor共转后对HepG2和Hep3B细胞增殖功能的影响
讨论
参考文献
英文缩略词
全文小结
攻读学位期间发表论文
致谢
声明
