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【6h】

弓形虫感染诱导的DC2.4树突状细胞外泌体差异性miRNA特性研究

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目录

摘要

1研究背景

2.1 实验材料

2.1.1细胞系和弓形虫虫株

2.1.2实验试剂

2.1.3实验仪器

2.1.4主要试剂的配制

2.2 实验方法

2.2.1细胞系和弓形虫虫株的培养增殖

2.2.2外泌体分离

2.2.3用透射电子显微镜检测外泌体的形态

2.2.4通过纳米粒子追踪分析检测外泌体的大小和数量

2.2.5蛋白质印迹(Western,Blot,WB)

2.2.6用Q-PCR验证差异miRNA

2.2.7生物信息学分析

2.2.8流式细胞仪检测DC2.4细胞的凋亡水平

2.2.9 PKH67染色标记外泌体追踪实验

2.3 差异表达miRNA的筛选

2.3.1外泌体miRNA的测序

2.3.2差异表达miRNA的筛选方法

3实验结果

3.1 用RH-GFP感染评估弓形虫RH虫株对DC2.4的感染情况

3.2 外泌体的形态学鉴定

3.3 外泌体的蛋白质印迹鉴定和纳米颗粒追踪分析(NTA)

3.4 弓形虫感染和未感染的DC2.4细胞外泌体miRNA测序及差异miRNA分析

3.5 用Q-PCR验证差异表达的miRNA

3.6 预测和分析差异miRNA的靶基因

3.7 外泌体共培养凋亡检测实验

3.8 外泌体PKH67示踪实验

4讨论

5小结

参考文献

缩略词对照表

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