肿瘤血管生长因子受体结合抑制肽的筛选和肿瘤疫苗的构建

摘要

目的:本实验试图通过能中和VEGF生物活性的单抗从噬菌体随机7肽、12肽文库中筛选一种能抑制VEGF与血管内皮细胞表面受体KDR(kinasedomainreceptor)结合的VEGF模拟短肽。对VEGF分子的受体结合位点进行定位，探讨小分子短肽作为血管细胞生长抑制剂、肿瘤疫苗可行性。方法:以两个具有中和VEGF活性的抗-VEGF单克隆抗体JH121、VG189为目标，分别对噬菌体随机7肽、12肽库进行筛选。并通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定。ELISA分析阳性噬菌体克隆与抗体的亲和力。用高亲和力克隆免疫小鼠检测噬菌体表达短肽的免疫原性。检验这种短肽可否模拟VEGF的抗原决定簇诱发机体产生能与VEGF结合的抗体，研究小鼠抗血清对HUVEC(人脐静脉血管内皮细胞)生长的抑制作用以及噬菌体表达的7肽和12肽对HUVEC生长的抑制作用。结果:对肽库进行三轮筛选后，噬菌体克隆具有良好的富集效果。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％，通过ELISA检测与抗体有高亲和力的克隆。

目录

摘要

一、 前言

二、 实验器材及试剂

三、 实验设计及步骤

四、 实验结果分析

五、 讨论

六、 实验总结和展望

英文缩略词表

参考文献

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