海洋真菌次生代谢产物鹿角缩酮B对大鼠CYP3A2的作用研究

摘要

目的:
　　本文通过计算机辅助的分子对接、体外肝微粒体温孵法和大鼠体内药动学研究XyloketalB对大鼠肝CYP3A酶活性的影响,为临床研究提供实验依据。
　　方法:
　　1.采用计算机辅助的分子对接法以Total-Score打分判断Xyloketal B与CYP450主要亚型的空间结合能力。
　　2.以MDZ为“探针”底物,体外肝微粒体温孵法考察Xyloketal B对大鼠肝CYP3A作用以及其作用机制。
　　3.以整体动物为模型,MDZ为“探针”药物,考察Xyloketal B对MDZ及其主要代谢产物1'-OH MDZ的药代动力学的影响,并用Western Blot和P450-GloTM试剂盒测定Xyloketal B对体内CYP3A的影响。
　　结果:
　　1.通过分子对接的打分函数评价XyloketalB与CYP450主要亚型的空间结合能力,打分结果分别为:CYP3A4-3NXU:6.0461;CYP11B2-4DVQ:5.0078;CYP2D6-3TBG:4.9342;CYP2C9-1R90:3.4475;CYP1A2-2HI4:-1.2051;CYP2E1-3T3Z:-8.3081;CYP2A6-2FDV:-16.2292;结合能力为:CYP3A4>CYP11B2>CYP2D6>CYP2C9>CYP1A2>CYP2E1>CYP2A6,提示XyloketalB与CYP3A4亲和力最高,两者的空间结合度最佳。
　　2.酶动力学显示,Xyloketal B为大鼠肝微粒体CYP3A的弱抑制剂,IC50为27.91μmol/L,Ki、Ki'、KI和Kinact分别为41.85μmol/L、31.67μmol/L、0.063μmol/L和0.0037min-1,为不可逆的混合型非竞争-反竞争性抑制剂,并具有NADPH,孵育时间和浓度依赖性,表明Xyloketal B以Mechanism-based机制抑制CYP3A的活性。
　　3.结果表明:与生理盐水和大豆油组比,酮康唑显著地增加了AUC0-t和Cmax,同时降低了CL/F和1'-OH MDZ和MDZ AUC0-inf的比值,并均显示有统计学意义。与生理盐水比,14 mg/kg Xyloketal B显著性地升高了MDZ的AUC0-t和Cmax分别为1.68倍和2.73倍(p<0.05)。然而,CL/F和1'-OH MDZ和MDZ AUC0-inf的比值分别降低了2.22倍和1.63倍。但7 mg/kg Xyloketal B对MDZ的AUC0-t、Cmax和CL/F无影响。当与大豆油组比,Xyloketal B剂量依赖性地增加了MDZ的AUC0-t和Cmax,AUC0-t增加1.41-2.65倍(p<0.05或 p<0.01),Cmax增加1.36-2.84倍(p<0.05或 p<0.01),CL/F降低1.35-2.7倍(p<0.05)。与生理盐水和大豆油组比,Xyloketal B剂量依赖性抑制了CYP3A2的蛋白表达和CYP3A2酶活性。
　　结论:
　　计算机辅助药物分子对接方法筛选Xyloketal B与CYP3A4空间结合度佳;体外肝微粒体温孵法结果表明Xyloketal B为混合型非竞争-反竞争性抑制剂,并具有NADPH,时间和浓度依赖性。所有药动学参数表明,Xyloketal B通过抑制大鼠体内 CYP3A活性使MDZ的药动学发生改变,Xyloketal B剂量依赖性地抑制了CYP3A2的蛋白表达和酶活性。Xyloketal B具有改变CYP3A底物临床代谢的特性。

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第一章 文献综述

1. 海洋微生物次生代谢产物的研究进展

2. Xyloketal B研究进展

3. 细胞色素P450 3A在药物代谢方面的研究应用与进展

4. 本论文研究的目的及内容

第二章 分子对接预测Xyloketal B-CYP450主要亚型亲和力

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 实验结果

4. 实验讨论

第三章 肝微粒体温孵法研究鹿角缩酮B(Xyloketal B)对大鼠肝细胞色素CYP 3A的作用及作用机制

第一节 反相高效液相色谱法体外测定大鼠肝微粒体孵育体系中1'-OH MDZ方法学的建立

第二节Xyloketal B对大鼠肝细胞色素CYP3A酶活性的影响及作用机制的研究

第四章 血药浓度法研究Xyloketal B对大鼠CYP3A的影响

第一节 大鼠血浆中MDZ及其代谢物1'-OH MDZ分析方法的建立

第二节 Xyloketal B对大鼠体内MDZ及其代谢产物1'-OH MDZ的影响

第五章 总结与展望

1. 全文总结

2. 课题创新之处

3 展望

参考文献

攻硕期间发表论文

致谢