血管紧张素Ⅱ通过p38MAPK、JNK和JAK2信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞向角质细胞分化

摘要

研究目的：
　　探讨血管紧张素II（Angiotensin II，AngII）对骨髓间充质干细胞（BoneMesenchymal Stem Cells，BMSCs）向角质细胞分化的影响及其信号机制，探究血管紧张素II促进创面愈合的机制。
　　研究方法：
　　1．分离培养正常Wistar大鼠BMSCs。
　　2．流式细胞仪检法检测BMSCs表面抗原的表达。
　　3. BMSCs多向分化能力的鉴定。
　　4．酶联免疫吸附试验测定BMSCs中AngII分泌浓度。
　　5．免疫细胞化学法测定成角质诱导后BMSCs中角蛋白10的表达。
　　6．流式细胞仪法检测AngII、Losartan、PD123319及其下游信号分子阻滞剂对BMSCs成角质诱导后角蛋白10阳性细胞数的影响。
　　研究结果：
　　流式细胞仪检测BMSCs表面标志CD29和CD90阳性表达率均在99％及以上，CD34、CD45阳性表达率均小于2%。AngII在细胞上清液中的浓度随培养时间增加呈递增趋势（P<0.05）。流式细胞仪检测添加AngII的成角质诱导组中BMSCs的K10阳性百分率在7d和14d分别为69.02%和82.1%明显高于对照组（P<0.05）。而添加Losartan，及下游信号分子阻滞剂SB203580、AG490、SP600125后，K10阳性细胞数减少(P<0.05)。
　　结论：
　　AngII可显著提高BMSCs向角质细胞的转化率，P38 MAPK、JAK2、JNK信号通路与AngII介导的作用密切相关。AngII促进BMSCs向角质细胞转化可能是其促进创面上皮化的机制之一。

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1 前言

1. 1血管紧张素的结构、分类及其生物学特性

1.2血管紧张素 I I 在骨髓间充质干细胞中的发现

1.3血管紧张素 I I 对创面愈合的影响

2 材料与方法

2.1实验动物

2.2实验试剂

2.3主要设备及仪器

2.4大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离及培养

2.5大鼠骨髓间充质干细胞的鉴定

2.6酶联免疫吸附试验测定 BMSCs中 AngII分泌浓度

2.7 血管经张素II 对MSCs迁移的影响

2.8血管经张素 II对 MSCs成角质分化的影响

2.9血管紧张素II 1型受体（ AT1R） ，血管紧张素II 2型受体（AT2R）阻滞剂及下游信号分子JNK，p38 MAP Kinase， PI3-Kinase， MKK， JAK2/3阻滞剂对BMSCs成角质分化的影响。

3 结果

3.1 BMSCs体外培养的形态学观察及鉴定

3.2细胞划痕实验测定血管紧张素II对MSCs迁移的影响。

3.3酶联免疫吸附试验测定BMSCs中血管紧张素II分泌浓度

3.4 BMSCs成角诱导后细胞形态特征

3.5 BMSCs成角质诱导后K10的检测

4 讨论

5 结论

6 缩略词表

参考文献

8 攻读硕士学位期间发表的论文

9 攻读硕士学位期间参加的会议

致谢