IL-1β可独立激活人滑膜细胞的TNF相关分泌蛋白质组

摘要

滑膜炎是导致骨性关节炎（osteoarthritis,OA）关节内炎性微环境的主要原因。目前，例如抗TNF试剂和IL-1类似物等多种单一生物靶向药物对OA是否具疗效仍证据不足。表征OA的滑膜组织磷酸化动态可为OA生物靶向治疗策略提供独特的实验依据。因此，本研究比较了OA和急性关节骨折的滑膜组织磷酸化蛋白组，发现OA滑膜磷酸化蛋白质的总数显著高于骨折滑膜，且有82个特殊的磷酸化蛋白质仅可在OA组中被鉴定。发现OA滑膜中的差异表达蛋白（differentially expressed proteins,DEPs）集中调控内质网/高尔基体（ER/Golgi）相关的分泌与细胞增殖。经体外细胞模型和基于数据非依赖型（data-independent acquisition,DIA）质谱技术，发现IL-1β可介导人滑膜细胞（human synoviocytes,HS）蛋白质的分泌，这些分泌蛋白质聚焦调节内含体运输，内质网/高尔基体分泌,补体激活和胶原蛋白降解。进而，发现IL-1β能特异性抑制HS内吞，并激活TNF通路中19个下游蛋白的分泌。总之，我们的结果表明OA滑膜组织存在以调控细胞分泌行为特征的极化的磷酸化蛋白组；证明了IL-1β是HS炎症转化的充分条件，且其可独立激活人滑膜细胞的TNF相关分泌组。

目录

声明

前言

1.1研究意义

1.2国内外研究进展

1.2.1磷酸化蛋白组学与疾病

1.2.2 OA研究现状

1.2.3抗细胞因子疗法

1.2.4抗TNF疗法

1.2.5抗IL-1β疗法

2技术路线

3材料和方法

3.1主要材料和仪器

3.1.1组织与细胞

3.1.2试剂与材料

3.1.3仪器

3.2方法

3.2.1人滑膜组织的获取

3.2.2滑膜组织蛋白的提取

3.2.3蛋白浓度的测定

3.2.4蛋白质的溶液酶解

3.2.5磷酸化肽段的富集

3.2.6磷酸化蛋白质的质谱分析

3.2.7差异表达蛋白的鉴定

3.2.8磷酸化蛋白质的生物信息学分析

3.2.9免疫组化实验（Immunological Histological Chemistry, IHC）

3.2.10人滑膜细胞的培养与处理

3.2.11细胞模型的建立及细胞因子小球微阵列分析（cytokine bead array, CBA）

3.2.12流式细胞仪检测

3.2.13 HS分泌蛋白的提取

3.2.14 SDS-PAGE电泳

3.2.15考马斯亮蓝染色

3.2.16 HS分泌蛋白质的酶解

3.2.17 HS分泌蛋白的质谱鉴定

3.2.18蛋白质的物理化学性质分析

3.2.19分泌蛋白的IPA分析

3.2.20成纤维细胞的培养与处理

3.2.21细胞內吞（Endocytosis）能力分析

3.2.22统计方法

4 结果

4.1人OA滑膜组织磷酸化蛋白质组不同于骨折组

4.2 OA滑膜组织中上调磷酸化蛋白质组集中调控分泌和增殖

4.3人炎性滑膜细胞模型的建立

4.4 HS分泌组的数据特征

4.5 HS分泌质的理化特征

4.6 IL-1β可诱导TNF下游蛋白质的分泌

4.7 IL-1β抑制HS内吞

5讨论

全文总结及创新性说明

创新性

参考文献

附录Ⅰ

在学期间发表论文

致谢