3,4-二羟基苯甲酸甲酯对急性高眼压小鼠视网膜节细胞的保护作用

摘要

目的：急性青光眼可导致视网膜节细胞的死亡，是造成全球不可逆失明的主要原因之一。因此，保护视网膜节细胞是预防急性青光眼的一个重要策略。小分子3,4-二羟基苯甲酸甲酯（methyl3，4dihydroxybenzoate，MDHB）在体外实验中已经证明了具有神经保护作用，而且近期的工作也表明它可以保护感光细胞退化小鼠视网膜的结构和功能。因此本课题的研究目的是：MDHB是否可以保护急性高眼压下视网膜节细胞，并探讨其保护机制。 方法：通过前房穿刺使小鼠眼内压迅速升高到90mmHg,并持续灌注60min，从而导致视网膜缺血和视网膜节细胞的死亡。在小鼠进行急性高眼压损伤之后，连续四天腹腔注射MDHB（35,70,140mg/kg体重）或等剂量的对照溶剂。通过Brn3a（节细胞的标记物）、CHAT（Starburst无长突细胞的标记物）和H＆E（苏木精和伊红）染色分别来检测视网膜节细胞、无长突细胞的存活率和视网膜的结构;通过Western blot来检测神经营养因子、炎症、氧化应激相关蛋白的表达，包括BDNF/TrkB、Nrf2/HO-1、PI3K/AKT以及MAPK/ERK信号通路；通过离体多电极阵列记录系统来检测节细胞光反应的变化。 结果：（1）急性高眼压损伤后四天，视网膜节细胞的密度明显减少，而MDHB治疗之后可以明显提高节细胞的存活率，其中70mg/kg的浓度保护效果最佳；（2）与对照组相比，MDHB治疗之后明显增加视网膜的厚度，保护视网膜无长突细胞；（3）MDHB减少急性高眼压损伤后活性氧自由基的积累、减少细胞的凋亡并抑制胶质细胞的活化；（4）MDHB上调视网膜中BDNF和TrkB蛋白表达、上调AKT和ERK磷酸化水平、下调Nrf2/HO-1蛋白。（5）MDHB恢复急性高眼压损伤后节细胞的平均光反应。 结论：本文的研究结果表明MDHB可以保护急性高眼压损伤后的视网膜节细胞，其机制可能与抑制氧化应激、抗凋亡和激活BDNF/TrkB、AKT、ERK信号通路相关。因此MDHB可能会成为一种治疗急性青光眼的理想药物。

目录

声明

1.前言

1.1 青光眼流行病的研究现状

1.2 青光眼的动物模型

1.3 青光眼的发病机制

1.4 信号通路

1.5 2,3-二羟基苯甲酸甲酯

1.6 实验设计

2．设备与材料

2.1 实验设备

2.2 实验试剂

2.3 试剂配制

3.实验内容

3.1 实验动物

3.2实验方法

3.3 统计学方法

4.实验结果

4.1 急性高眼压损伤后视网膜节细胞的存活率显著性降低

4.2 MDHB提高急性高眼压损伤后视网膜节细胞的存活率

4.3 MDHB保护急性高眼压损伤后视网膜的结构

4.4 MDHB抑制急性高眼压损伤后活性氧自由基的累积

4.5 MDHB减少急性高眼压损伤后视网膜的凋亡

4.6 MDHB减少胶质细胞的活化

4.7 MDHB上调AKT的磷酸化水平

4.8 MDHB上调ERK的磷酸化水平

4.9 MDHB上调BDNF及其受体TrkB的表达

4.10 MDHB下调Nrf2/HO-1蛋白的表达

4.11 MDHB提高急性高眼压损伤后节细胞的光反应

5．讨论

5.1 MDHB对视网膜节细胞及视网膜的保护作用

5.2 MDHB对抗急性高眼压对视网膜节细胞损伤的可能机制

5.3 下一步计划

6.结论

参考文献

英文缩略词索引

在校期间发表论文清单

致谢