基于环介导等温扩增技术的三种对虾病原检测方法的建立与应用

摘要

随着人们对对虾食用需求的增加，国内对虾养殖业大规模扩建，存在的对虾病害问题变得尖锐。染病对虾根据早期临床症状难辨其明确病害，而早知早治对对虾养殖业至关重要，常规检测由于其本身缺陷，不适用于现场检测，环介导等温扩增（Lamp）无需循环变温，只需较短时间和较简仪器就能完成高灵敏度、高特异性的扩增。因此本研究针对三种常见且危害极大的对虾病害：肝肠胞虫病、白斑综合症病毒和副溶血弧菌建立Lamp快速检测技术，并将其与便携式现场检测箱结合，形成对虾病害现场检测技术。 针对18S rRNA、ORF21、tlh基因建立肝肠胞虫病、白斑综合症病毒和副溶血弧菌Lamp检测方法，在对肝肠胞虫病检测体系进行优化的基础上，进行灵敏度、特异性、实际样品等实验。结果显示检测方法稳定性良好，对相应病害的检出特异性检出，灵敏度均高于PCR方法至少10倍，其中肝肠胞虫病、白斑综合症病毒灵敏度达0.1fg/μL，副溶血弧菌最低检测限达1fg/μL，实际样品检测率与PCR方法相同。将建立的三种病害检测方法与现场检测箱结合，现场检测结果与复核结果一致，检测时间和准确度均符合要求。 本研究建立的高灵敏度、高特异性的对虾三种病害Lamp检测技术，结合现场检测箱可实现高效直观简便的现场检测，该技术适合推广于基层和养殖场的对虾病害检测中。

目录

声明

第一章 绪论

1.1 几种重要的对虾病害病原

1.2 对虾病害目前检测方法及存在问题

1.3 现场快速检测技术发展趋势

1.4 研究内容

1.5 研究的必要性

第二章 对虾肝肠包虫Lamp检测方法的建立

2.1 实验材料与设备

2.2 方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

第三章 白斑综合症病毒Lamp检测方法的建立

3.1 实验材料与设备

3.2 方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第四章 副溶血弧菌 Lamp检测方法的建立

4.1 实验材料与设备

4.2 方法

4.3 结果与分析

4.4 讨论

第五章 环介导等温扩增技术（Lamp）在水产养殖现场快检中的应用

5.1 现场检测设备

5.2 现场检测实验

5.3 讨论

第六章 结论与展望

6.1结论

6.2创新点

6.3展望

参考文献

附录

致谢