氢盐水对严重烧伤延迟复苏大鼠肠道损伤保护作用的实验研究

摘要

研究背景：
　　严重烧伤后体液大量外渗或潴留于组织间隙从而导致血容量不足甚至休克。在神经和内分泌系统作用下，血流重新分布，肠道最易最早发生缺血。一定时间后肠粘膜上皮细胞中的黄嘌呤脱氢酶在钙离子作用下转化为黄嘌呤氧化酶。复苏补液使得血容量恢复，大量氧分子进入组织细胞中与次黄嘌呤或黄嘌呤氧化酶反应，产生超量的活性氧（reactive oxygen species，ROS）。过量的活性氧损伤肠道粘膜，破坏屏障，细菌和毒素容易移位，导致全身感染，诱发全身炎症反应综合症（systemic inflammatory response syndrom,SIRS）乃至多器官功能障碍综合症（multiple organ dysfunction syndrom,MODS）。目前，感染及MODS仍是烧伤患者最重要的死亡原因。氢盐水对清除活性氧有潜在应用前景，可能减轻氧化应激和减少炎症介质的释放，从而起到保护肠道及远位器官的作用。本文就将氢盐水能否减轻严重烧伤后大鼠肠道的氧化损伤进行研究。
　　研究方法：
　　48只SD大鼠随机分为四组，分别为：假烫+生理盐水组(S, n=12)，大鼠背部接触室温下水浴作为假烫对照；烧伤+生理盐水组(B+N, n=12)，大鼠背部给予30％TBSAIII度烧伤，用生理盐水治疗；烧伤+氢盐水组(B+H, n=12)，大鼠背部给予30%TBSAIII度烧伤后予以氢盐水治疗；烧伤+维生素C组(B+ C, n=12)，大鼠背部30%TBSAIII度烧伤后给予维生素C治疗。伤后6小时按Parkland公式用林格氏液补液复苏。每组大鼠在伤后6h，18h，30h，42h腹腔分别注射生理盐水5ml/kg，氢盐水5ml/kg，维生素C9ml/kg(250mg/kg)。伤后24h、48h各组分别处死6只大鼠并取肠道组织进行相关指标检测。1.肠道病理变化（HE染色），以此评价肠道粘膜组织学损伤情况；2.肠道组织丙二醛（Malondialdehyde， MDA)及IL-1β的含量，评价氧化损伤程度和炎症的变化。3.肠道组织二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO)的含量，以此评价肠道粘膜的完整性；4.肠道绒毛上皮细胞凋亡率，评价肠道绒毛上皮细胞的凋亡情况。
　　研究结果：
　　严重烧伤延迟复苏可引起大鼠肠道组织损伤，肠粘膜病理形态的改变体现为绒毛变短，绒毛上皮细胞变性、坏死、脱落，绒毛间隙增宽等。应用氢盐水及维生素 C可明显改善肠粘膜的上述损伤。48h肠粘膜病理形态破坏程度比24h显著加重（P<0.01）。且24h和48h氢盐水和维生素C处理对肠粘膜病理形态的改善均无明显差异。
　　B+N组肠道组织MDA较S组显著增多（P<0.01）,而B+H组和B+C组的MDA则显著少于B+N组（P<0.01）。于伤后24h达高峰。48h维生素C处理的效果较氢盐水改善明显（P<0.05）。
　　与S组相比，B+N组肠道组织IL-1β表达显著升高(p<0.01)，以伤后48h升高为明显。氢盐水及维生素C能显著减少大鼠肠道炎症因子表达(B+H vs. B+N, p<0.01;B+C vs. B+N, p<0.01)。在伤后24h B+H组肠道组织IL-1β的表达较B+C组改善明显。
　　DAO的检测结果示，B+N组肠道组织DAO的含量较S组显著降低，以伤后48h降低最为明显。氢盐水及维生素C可显著增加肠道组织的DAO（B+H vs. B+N,P<0.01;B+C vs. B+N,P<0.01）。且在48hB+H组肠道组织DAO增高的程度比B+C组明显（P<0.05）。
　　B+N组肠道绒毛上皮细胞凋亡较S组显著升高（p<0.01），以伤后24小时升高为明显（P<0.05）。氢盐水及维生素C可显著降低肠道绒毛上皮细胞的凋亡率。(B+H vs. B+N, p<0.01;B+C vs. B+N, p<0.01)。24h和48h氢盐水和维生素C处理对肠绒毛上皮细胞凋亡的改善均无明显差异。
　　结论：
　　氢盐水能通过减少氧化应激改善严重烧伤延迟复苏引起的肠道粘膜的损伤。

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声明

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中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1.材料

2 方法

实验结果

1.肠道组织的病理变化

2.肠道组织丙二醛（MDA）的变化

3.肠道组织DAO 的变化

4.肠道组织IL-1β的变化

5.肠道绒毛上皮细胞凋亡

讨论

1. 富氢盐水对严重烧伤延迟复苏肠道病理形态改变的影响

2.富氢盐水对严重烧伤延迟复苏肠道粘膜屏障损伤的保护作用

3.氧化应激与严重烧伤延迟复苏

结论

参考文献

致谢

附录A英文缩写一览表

附录B 课题论著 ： 富氢盐水对严重烧伤延迟复苏大鼠肠道损伤的影响

附录C 综述： 活性氧介导肠道缺血再灌注损伤机制的研究进展