副鸡禽杆菌荚膜多糖提取分析及免疫原性研究

摘要

副鸡禽杆菌(Apg)可引起鸡传染性鼻炎，该病是以鸡头和眼睑肿胀为主要症状的急性呼吸道传染病，主要引起育成鸡生长发育受阻和淘汰率增加，且造成蛋鸡产蛋量明显下降，给我国养禽业造成了巨大损失。
　　2012年12月，我国南方某些蛋鸡养殖场出现了大量疑似鸡传染性鼻炎的病例，本研究对送检病鸡样品进行了细菌学检测。通过细菌分离、PCR、平板凝集试验，鉴定出4株副鸡禽杆菌，人工感染试验鸡能复制出与临床表现一致的病例。采用血凝和血凝抑制试验对分离菌株进行血清学分型，最终确认引起该病的病原体是B型副鸡禽杆菌。
　　为了探讨以荚膜多糖(CPS)为抗原成份研发该病新型疫苗的可行性，本研究用乙醇沉淀法在副鸡禽杆菌培养液上清中提取荚膜多糖，以苯酚-硫酸法测定其含量，并利用高效液相色谱(HPLC)分析多糖组分及分子量大小。结果显示，每升菌液可以抽提得到荚膜多糖85mg，含量为62％，该多糖主要由L-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖等单糖组成，分子量约为209Ku。
　　通过动物实验，分别研究了荚膜多糖和血凝素(HA)成份单独接种或混合免疫的免疫保护效果。用HA、C按PS和CPS+HA分别免疫SPF鸡后进行攻毒试验，在首免、二免后分别采血，利用ELISA方法检测血清抗体效价并计算各试验组鸡只的保护率。结果显示在免疫剂量和免疫途径相同时，CPS+HA联合免疫组抗体水平高于HA、CPS单独免疫组;与肌肉注射相比，眶下窦注射免疫可显著提高血清抗体水平和保护率。表明B型副鸡禽杆菌荚膜多糖具有一定的免疫原性，且与HA结合后免疫保护率也有显著提高。

目录

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摘要

缩略词

第1章 绪论

1．1 副鸡禽杆菌研究进展

1．2 副鸡禽杆菌生物学特征

1．3 副鸡禽杆菌诊断方法

1．4 副鸡禽杆菌的分型

1．5 毒力因子

1．6 荚膜多糖

1．7 多价细菌荚膜多糖-蛋白质结合物联合疫苗

1．8 论文立题依据、意义及内容

1．9 技术路线

第2章 B型副鸡禽杆菌安徽分离株的分离与鉴定

2．1 前言

2．2 实验材料

2．3 实验方法

2．4 结果与分析

2．5 讨论

2．6 本章小结

第3章 副鸡禽杆菌荚膜多糖的提取及HPLC分析

3．1 前言

3．2 实验材料

3．3 实验方法

3．4 结果与分析

3．5 讨论

3．6 本章小结

第4章 副鸡禽杆菌荚膜多糖结合蛋白免疫原性的研究

4．1 前言

4．2 实验材料

4．3 实验方法

4．4 结果

4．5 讨论与分析

4．6 本章小结

结论

参考文献

致谢

作者简介

攻读硕士学位期间发表的论文