泰地罗新肌注后在猪体内的残留消除研究

摘要

泰地罗新(tildipirosin)是泰乐菌素的衍生物，是英特威公司开发的最新动物专用的大环内酯类半合成抗生素。在兽医临床上，泰地罗新用于治疗猪、牛由敏感菌引起的呼吸系统感染性疾病，单次给药即可提供全程治疗，猪肌内注射、牛颈部皮下注射给药。其无菌注射液的商品名为Zuprevo，于2011年3月8日通过了欧盟兽用药品委员会的市场许可申请，随后在欧盟国家相继批准上市。
　　泰地罗新在动物体内组织残留的研究报道很少，为了解泰地罗新在猪体内的残留消除，本试验采用高效液相色谱串联质谱法检测猪组织中泰地罗新的浓度，研究泰地罗新在猪可食性组织的残留消除，为制定泰地罗新注射液肌注给药后在猪的休药期提供实验依据。
　　通过对高效液相色谱串联电喷雾三重四级杆质谱条件的优化，确定了猪组织中泰地罗新的HPLC-MS/MS检测条件，以C18为分析色谱柱，0.1％的甲酸水-乙腈为流动相，进行梯度洗脱，制备猪腹脂、肌肉、肝脏、肾脏的标准曲线。测得猪各组织中泰地罗新在2.5μg/kg~250μg/kg范围内，相关系数大于0.996。通过空白样品添加回收实验，所有基质中泰地罗新的检测限和定量限分别为1.25μg/kg和2.5μg/kg，泰地罗新在2.5、25、250μg/kg三个添加水平下的回收率为66.3%~97.2%，批内、批间变异系数为1.0%~14.3%,样品前处理和检测方法的回收率高，精密度好，满足残留分析的要求。
　　选用32头健康三元杂交猪，进行泰地罗新的消除,研究，其中2头作为空白对照，其余的30头随机分为6组，每组5头猪。按4mg/kg b.w.剂量肌注泰地罗新注射液，于给药后6 h、1 d、3d、6d、9d和14 d各宰杀1组猪，分别采集每头猪的肌肉、注射部位肌肉、肝脏、肾脏和腹脂组织，用高效液相色谱串联质谱法分别对各组织中的泰地罗新残留量进行测定。
　　结果表明：4%的泰地罗新注射液按4mg/kg b.w.剂量肌注给药后，在猪体内消除较慢，在组织中持续时间长短为注射部位>肾脏>肝脏>腹脂>肌肉，注射部位除外，在肾脏中的残留浓度最高，残留时间最长，因此，建议肾脏可作为泰地罗新违规使用的监控靶组织。欧盟规定泰地罗新在猪肌肉、腹脂、肝脏、肾脏的最高残留限量分别为1200μg/kg、800μg/kg、5000μg/kg、10000μg/kg，另外，―Committee for Medicinal Products for Veterinary Use这篇文章推荐在注射部位的最高残留限量为7500μg/kg。本研究根据此规定，采用WT1.4休药期软件对肌注泰地罗新在猪的休药期进行计算，结果显示，泰地罗新按4mg/kg b.w.剂量肌注给药后在猪注射部位、肾脏、肝脏、腹脂、肌肉的休药期依次为9.3d、7.8d、7.0d、4.2d、0d。由于制剂的泰地罗新在猪注射部位的休药期最长，建议4%的泰地罗新注射液按4mg/kg b.w.剂量肌注给药后，在猪的休药期为10d。

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1 前言

1.1 泰地罗新研究概况

1.1.1 大环内酯类抗生素的概述

1.1.2动物专用大环内酯类抗生素

1.1.3 泰地罗新简介

1.1.4 泰地罗新制剂

1.1.5 泰地罗新的理化性质和抗菌作用机制

1.1.6 泰地罗新的药代动力学

1.1.7 泰地罗新的药代动力学特征及其临床应用

1.1.8 泰地罗新的毒性

1.2 研究的目的和意义

2 材料与方法

2.1材料

2.1.1 药品与试剂

2.1.2 仪器与设备

2.1.3 试液的配置

2.2方法

2.2.1 猪组织中泰地罗新残留测定的液相色谱—串联质谱法

2.2.2 泰地罗新在猪体内的残留消除研究

3 结果与分析

3.1方法学验证

3.1.1 色谱行为

3.1.2 标准曲线及线性范围

3.1.3检测限（LOD）和定量限（LOQ）

3.1.4 回收率及变异系数

3.2泰地罗新在猪的残留消除

3.2.1 组织样品质谱图

3.2.2 停药后猪各组织中泰地罗新浓度的测定结果

3.2.3 泰地罗新休药期的计算

4 结论与讨论

4.1质谱分析条件的建立

4.2液相条件的确定

4.2.1 色谱柱的选择

4.2.2 流动相的选择

4.2.3 流动相洗脱程序的确定

4.3前处理方法的优化

4.3.1 提取剂溶剂的选择

4.3.2 净化条件的选择

4.3.3 脱脂

4.3.3 样品基质效应的消除

4.4泰地罗新在猪组织中的残留检测

4.5泰地罗新在猪组织中的残留规律

4.6猪肌注泰地罗新注射液后休药期的确定

全文总结

致谢

参考文献