三种烟草病毒在烟田土壤中的分布动态及在烟草中的互作

摘要

烟草（Nicotiana tabacum L）是一种重要经济作物。病毒病给烟草产业带来严重的经济损失。其中，烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）的危害最为严重。近年来，烟田中两种或者多种病毒复合侵染的比例日益增高。烟田土壤带有TMV、CMV、PVY是导致烟株带毒的重要因素。
　　为了建立高效的烟田土壤病毒检测方法，搞清烟草中多重病毒互作的机理，本文展开了系列研究，主要结果如下：
　　1本研究建立了完善的烟田土壤携带病毒的检测方法。分别利用 ELIS A、RT-PCR、荧光定量RT-PCR和RT-LAMP的方法均可以对烟田土壤中的TMV、CMV、PVY进行有效检测。四种方法检测TMV灵敏度分别为10-3g土/mL、10-3、10-5和10-6；检测CMV的灵敏度分别是10-1g土/mL、10-1、10-3和10-4；检测PVY的灵敏度分别为10-2 g/mL、10-2、10-4和10-5。
　　2侵染烟草的三种主要病毒在土壤中的分布与含量不同。TMV、PVY的分布最为广泛，CMV最少。随着距离感病烟草根部垂直距离和水平距离的增加，土壤中病毒的含量逐渐减少。随着烟株种植时间的增长，土壤中病毒的积累量和扩散能力都增大。烟草连作土壤里的病毒含量多于烟草与水稻轮作土壤里的病毒含量。
　　3在TMV和CMV复合侵染时，CMV对TMV的CP基因、MP基因、p-183基因和p-126基因的表达起干扰作用。TMV对CMV起协生作用，促进CMV2b基因、CP基因、MP基因、Rep基因的表达。这种干扰/协生作用在接种30天的时候到达一个向上/下的拐点。在TMV、CMV和PVY三种病毒复合侵染时，PVY对CMV起干扰作用，主要体现在抑制CMV2b基因、CP基因、MP基因、Rep基因的表达。PVY对TMV起协生作用，主要体现在促进TMV的MP基因和p-183基因的表达。复合侵染21天开始，PVY对TMV协生和CMV对TMV的干扰这两种作用逐渐达到平衡。复合侵染21~30天时，PVY对 CMV的干扰作用强于TMV对CMV的协生作用。复合侵染过程中，TMV、CMV严重干扰甚至抑制了PVY的基因表达。
　　以上工作的完成，对于深入了解烟田主要病毒的传播途径和在烟草中的互作机理，制定有效措施防控病毒病害，减少经济损失具有重要意义。

目录

声明

缩写词及英汉对照

1 前言

1. 1 烟草及烟草病毒病概述

1. 2 烟草三种常见病毒的基本特征

1. 3 烟草病毒的检测方法

1. 4土壤携带病毒研究简介

1. 5 植物病毒间的相互作用

1. 6 本研究的目的和意义

2 材料与方法

2. 1 实验材料

2. 2 实验方法

3 结果与分析

3.1 土壤中3种病毒的ELISA检测结果

3. 2烟草叶片和土壤总R NA的抽提

3.3 土壤中TMV、CMV、PVY的RT-PCR检测

3.4 土壤中TMV、CMV、PVY含量的荧光定量PCR测定

3. 5 土壤中3种病毒的RT-LAMP的检测及灵敏度分析结果

3.6 土壤样品TMV、CMV、PVY的4种检测方法的灵敏度比较

3.7 土壤样品TMV、CMV、PVY的4种检测方法的特异性比较

3. 8 烟草主要病毒在烟草体内的互作研究

4 结论与讨论

4 .1 结论

4 .2 讨论

致谢

参考文献

附录