海洋性蛭弧菌的生物学特性及消除沙门氏菌的初步研究

摘要

蛭弧菌是一类具有噬菌体功能,能对人类食物中毒的致病菌和导致渔业养殖病害具有良好裂解清除效果的寄生性微生物。 本实验采用DNB双层平板法以九孔幼鲍致病菌Shewanella algae strain 27作为宿主菌从广东汕尾一鲍鱼养殖场池底污泥中筛选得到3株可以裂解沙门氏菌的菌株。通过观测3株菌在DNB双层平板上形成的噬菌斑的形状,同时用透射电镜观察它们的形态,并对照《伯杰氏细菌鉴定手册》(第九版),可以鉴定这3株菌为蛭弧菌。 我们系统研究了各种环境因素包括pH值、盐度(NaCl)、二价金属离子(Ca2+、Mg2+)、谷氨酸钠和甘油对它们生长繁殖能力的影响,同时,我们在单因素实验的基础上,采用响应面的分析方法对蛭弧菌BDK-1的培养条件进行了优化。 本研究结果表明,3株海洋性蛭弧菌对3株沙门氏菌均具有比较好的裂解能力；3株蛭弧菌在pH6.0-8.0间均具有较好的生长繁殖能力,它们的最适pH为7.0;盐度对3株蛭弧菌的影响较小,在1.0-4.0％的盐度范围内均具有良好的生长活性,它们的最适盐度为2.5-3.5％； 二价金属离子(Ca2+、Mg2+)对蛭弧菌具有非常显著的影响,Ca2+、Mg2+浓度的提高(在0-7mM的范围内)可以有效增强蛭弧菌的生长活性和裂解效果； 甘油因子在实验期间对蛭弧菌的生长繁殖影响较小,最适浓度为3-5％时可促进蛭弧菌的生长繁殖；谷氨酸钠在浓度为3-7mM可显著提高蛭弧菌的生长繁殖能力。 蛭弧菌BDK-1的生长优化模型表明,其最佳培养条件为：宿主菌浓度为1×1010-1×1011CFU/mL,摇床速度为250rpm,盐度(NaCl浓度)为2.9％,培养液pH值为7.4,Ca2+、Mg2+浓度为6.4mM,谷氨酸钠浓度为4.2mM。蛭弧菌消除鸡蛋表面的沙门氏菌的人工模拟实验表明,蛭弧菌BDK-1在其浓度为106-1010PFU/mL时,可有效消除鸡蛋表面的沙门氏菌,显示了蛭弧菌在食品卫生安全应用的潜在价值。

目录

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第一章绪论

1.1蛭弧菌研究概况

1.1.1蛭弧菌的分类地位

1.1.2蛭弧菌的形态结构

1.1.3蛭弧菌的分布

1.1.4蛭弧菌的生长史

1.1.5蛭弧菌生长繁殖有关的因素

1.1.6蛭弧菌的生化特征

1.1.7蛭弧菌的基因组特征

1.1.8蛭弧菌的潜在应用

1.2弧菌性食源性疾病及其预防现状

1.2.1弧菌性食源性疾病概况

1.2.2致病性弧菌的预防、检测与消除技术进展

1.3沙门氏菌研究现状及其危害

1.3.1沙门氏菌的特征

1.3.2食品安全性及沙门氏菌的危害

1.3.3畜产品中沙门氏菌污染的危害

1.3.4抗生素的使用与细菌耐药性

1.4本实验的研究目的和意义

第二章蛭弧菌的分离、纯化与鉴定

2.1引言

2.2材料与仪器

2.2.1实验材料

2.2.2培养基与溶液

2.2.3仪器和设备

2.3实验方法

2.3.1宿主菌的培养和保存

2.3.2样品预处理

2.3.3蛭弧菌的分离

2.3.4蛭弧菌的纯化

2.3.5蛭弧菌的电镜观测鉴定

2.4结果与分析

2.4.1蛭弧菌分离、纯化结果与分析

2.4.2蛭弧菌鉴定结果与分析

2.5本章小结

第三章蛭弧菌对沙门氏菌的裂解研究

3.1引言

3.2材料与设备

3.2.1材料

3.2.2培养基与溶液

3.2.3仪器与设备

3.3实验方法

3.3.1宿主菌的浓缩液的制备

3.3.2蛭弧菌浓缩液的制备

3.3.3蛭弧菌浓缩液的浓度测定

3.3.4双层平板检测蛭弧菌对宿主菌的裂解能力

3.4结果与讨论

3.5本章小结

第四章蛭弧菌的基本生物学特性研究

4.1引言

4.2材料与设备

4.2.1实验材料

4.2.2试剂

4.2.3培养基与试剂

4.2.4仪器和设备

4.3实验方法

4.3.1宿主菌的培养

4.3.2蛭弧菌的培养和保存

4.3.3蛭弧菌和宿主菌数量的测定

4.3.4 pH值对蛭弧菌生长能力的影响

4.3.5盐度(NaCl)对蛭弧菌生长能力的影响

4.3.6甘油对蛭弧菌生长能力的影响

4.3.7二价金属离子(Ca2+Mg2+)对蛭弧菌生长能力的影响

4.3.8谷氨酸钠对蛭弧菌生长能力的影响

4.4结果与分析

4.4.1 pH值对蛭弧菌生长能力的影响

4.4.2盐度(NaCl)对蛭弧菌的影响

4.4.3甘油对蛭弧菌生长能力的影响

4.4.4二价金属离子(Ca2+、Mg2+)对蛭弧菌生长繁殖能力的影响

4.4.5谷氨酸钠对蛭弧菌生长能力的影响

4.5本章小结

第五章蛭弧菌培养条件的优化

5.1引言

5.2材料与设备

5.2.1实验材料

5.2.2试剂

5.2.3培养基

5.2.4溶液

5.2.5仪器和设备

5.3实验方法

5.3.1宿主菌的培养

5.3.2蛭弧菌的培养

5.3.3蛭弧菌培养条件优化

5.4结果与分析

5.5本章小结

第六章蛭弧菌消除鸡蛋表面沙门氏菌的研究

6.1引言

6.2材料与设备

6.2.1材料

6.2.2试剂

6.2.3培养基

6.2.4溶液

6.2.5仪器和设备

6.3实验方法

6.3.1宿主菌的培养

6.3.2宿主菌浓度的测定

6.3.3蛭弧菌的培养

6.3.4蛭弧菌浓度的测定

6.3.5模拟污染样品的制备

6.3.6空白对照的制备

6.3.7蛭弧菌对模拟污染样品表面的沙门氏菌的消除实验

6.4结果与讨论

6.4.1鸡蛋表面沙门氏菌吸附量的检测

6.4.2空白对照组的沙门氏菌的浓度检测

6.4.3蛭弧菌对模拟污染样品表面的沙门氏菌的消除试验

6.4.4浸泡液中蛭弧菌浓度

6.5本章小结

结论与展望

结论

展望

参考文献

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致谢