滋癸活血益经汤对卵巢功能围早衰期影响的临床及实验研究

摘要

本课题主要是在前期研究的基础上，进一步通过临床观察和实验研究，探讨滋癸活血益经汤对卵巢围早衰期储备功能影响的临床疗效及其相关机理。 1 文献研究: 人类卵巢的生长、发育、成熟/闭锁及其调控：卵泡发育不依赖于促性腺激素。而成熟则取决于性腺利用FSH的数量，以及卵巢颗粒细胞FSH受体的表达量<'[12]>。卵泡闭锁过程称为凋亡(apoptosis)。促性腺激素的撤退发挥重要的作用，但也与卵巢性激素、自分泌和旁分泌因素相关。维持卵泡完整性所需蛋白质 mRNAs 的变化，预示凋亡过程的开始<'[13]>。闭锁过程是促进或抑制凋亡的关键基因产物有序表达的结果。 POE的发病机制主要包括：原始卵泡储备减少、卵泡闭锁 (凋亡)加速、卵泡成熟障碍三大方面。生殖激素基础水平的测定，是判断卵巢储备力最重要和最可靠的指标。还包括INH 测定、激素动力学试验等。常用的治疗方法有：雌、孕激素序贯疗法、替代治疗、选择性雌激素受体调节剂、辅助生殖及卵巢移植等。卵巢功能衰退是一渐进性过程，闭经前多有1—4年的月经紊乱期并伴有潮热出汗等更年期症状。若在此期预测卵巢储备功能，对其早诊断、早治疗有重大意义。及时治疗可以通过提高 E2水平降低 FSH，以制止无效的卵泡消耗过程，从而为保护更多的卵泡赢得治疗时机，增加生育机会<'[90]>。自应用体外受精(IVF)治疗不孕症以来，对一些有正常月经周期的患者进行促排卵时，可出现卵泡闭锁及卵子质量下降，这是卵巢储备能力低下的表现，并且有可能发展成为卵巢功能衰竭。因此加强监测、评估卵巢储备功能对早期发现卵巢衰竭倾向和预测生育力的潜能具有重要的临床意义<'[91]>。中医学对卵巢功能早衰的研究包括：1．病因病机的研究：常见病因有外感、内伤生活及先天因素。病机包括：肾虚、肝郁、脾虚、气虚血瘀。2．治疗方面：辨证论治、专方治疗、中西医结合治疗、穴位治疗。3．疗效及机理的研究。4．相关问题及展望：提出治疗中用药的注意问题、提倡防重于治的思想、并主张改变观念及用中医药疗法保护卵巢及其功能。 2 临床研究: 2.1研究对象：对符合本研究所制定入组标准的52例患者 (其中含部分前期观察延续治疗的病例)，先按分区标准分区：L区 (2080IU/L)。各区再采用简单随机法分为治疗组和对照组。治疗组 (口服滋癸活血益经汤)和对照组 (口服乙烯雌酚、安宫黄体酮序贯疗法)，空白对照组 (采用就诊后因经济或条件所限未治疗的POF患者)，正常组 (采用门诊体检月经及内分泌指标正常者)。 2.2研究方法：治疗前后(周期为3个月)收集：1．基本资料、症状量表(含经况)2．内分泌三项 (FSH、LH、E2)3．卵巢子宫彩色B超 4．相关指标TNF-α、IL-2的检测数据。最后将数据用SPSS11.5统计软件处理。相关性检测使用spearman相关性分析。 2.3结果： 2.3.1卵巢功能围早衰期患者发病年龄分布在22-39岁之间，平均年龄为32±4.95岁，30岁后发病人数为30岁前的2倍。年轻组病例有增多趋势。发病与卵巢手术史、结扎史、人流史、子宫动脉介入栓塞等损伤有一定的相关性。各症状中以阴道干涩36例(69.23％)、性欲减退35例(67.31％)、潮热汗出32例(61.54％)、失眠梦多32例(61.54％)、烦躁易怒31例(59.62％)多见。以肝肾阴虚(82.69％)、气虚血瘀(73.08％)两种证型的出现频率最高。 2.3.2患者TNF-α水平较正常人有显著降低趋势；IL-2水平与正常人比较无显著变化。UV与UPS、FSH与LH、UV与OV呈显著正相关。 2.3.3临床疗效： 2.3.3.1症状改善方面：H和L区治疗组均可明显改善患者性欲减退、潮热汗出、阴道干涩症状(性欲减退尤甚)，对照组仅在性欲减退方面(H区)有所改善，H和L区各主症改善效果比较，治疗组明显优于对照组，L区症状改善明显较H区容易。两区患者如不采取治疗，将无法改善患者潮热汗出、阴道干涩、性欲减退的症状。 2.3.3.2内分泌FSH、LH、E2改善方面：L区治疗组治疗后FSH明显降低，且治疗后治疗组E2水平较对照组高。治疗组对降FSH、促E2上升方面优于对照组。H区治疗组与对照组治疗前后比较内分泌均无显著改变，两组在改善内分泌方面均不理想。 2.3.3.3L区疗效方面：治疗组17例患者中，月经来潮≥1次的有16例(94.12％)，内分泌恢复正常的7例，怀孕1例 (早孕2+月自然流产。)痊愈8例，显效7例，有效1例；对照组治疗6例中，3例月经来潮≥1次，内分泌恢复正常1例，无怀孕，痊愈1例，显效1例，有效3例。治疗组总有效率为88.24％，对照组总有效率为83.33％。 2.3.3.4H区疗效方面：治疗组9例患者中，月经来潮≥1次的有5例(55.56％)，内分泌恢复正常的1例，怀孕1例(2007年3月4日足月剖腹产一男婴，重7.6斤，母子健康。)痊愈2例，显效2例，有效1例；对照组治疗7例中，6例月经来潮≥1次，无一例内分泌恢复正常，无怀孕，痊愈0例，显效3例，有效1例。治疗组总有效率为55.56％，对照组总有效率为57.14％。 3 实验研究: 经临床研究表明中药治疗POF有一定的疗效，为进一步阐明中药对卵巢功能围早衰期卵巢储备功能影响的相关机理，进行了以下关于滋癸活血益经汤对POF动物模型的卵巢细胞因子INH及其mRNA表达影响的实验研究：选取健康BALB/c小鼠，雌性，SPF级，8—10周龄，体重18—20g，筛选正常性周期小鼠25只。造模方法：每只小鼠两后脚掌和皮下多点注射：10mg(0.05ml)卵巢抗原加CFA混合乳化液共0.1ml；1周后以10mg(0.05ml)卵巢抗原与IFA等量乳化加强免疫1次五天后再一次；正常对照组：缓冲液PBS代替卵巢抗原免疫作为正常组；分组治疗：造模组：不用中药；滋预组：从第一次免疫后即灌服滋癸活血益经汤(以下简称滋方)以预防POF的发生；滋治组：从第三次免疫后开始灌服滋方，温治组：从第三次免疫后开始灌服温经活血片水煎剂(以下简称温方)。在第三次免疫后5天摘眼球取血，留取血清，并颈椎脱位处死小鼠，留取卵巢。用Sanwich-E1isa方法测定血清INHB含量。留取卵巢，并用RT-PCR的方法测定INHBmRNA的表达；并观察自身免疫性卵巢炎组织形态学的改变。数据经SPSS11.5统计软件处理。 结果显示：使用大鼠卵巢作为特异性抗原免疫小鼠产生单纯免疫性卵巢炎建立自身免疫性卵巢功能衰退模型的小鼠血清的INH-B浓度较正常对照组明显降低，滋方及温方治疗可使该模型的小鼠血清的INH-B浓度升高，并且免疫早期用药较晚期升高要明显。结合用药后各组小鼠血清INH-B浓度与INHBmRNA表达的差异的比较，发现两者的药后变化有相似的趋势：正常对照组最高，造模组最低，滋预组较接近正常对照组，两者差异无显著性(P>0.05)。正常组、滋预组、滋治组、温治组、造模组中前两组与后三组比较有显著性差异，但三者较接近，呈下降趋势。从而说明这可能是滋方和温方治疗卵巢功能衰退的一个重要机理：通过增强卵巢INHBmRNA的表达，从而提高INH-B的浓度，改善卵巢的储备功能。 由于时间、经费和条件等因素，本研究仅从卵巢围早衰期患者的临床特点、相关的内分泌、免疫、彩超、POF的动物模型的卵巢分泌的细胞因子INH及其mRNA的表达等方面进行了研究，结果表明卵巢围早衰期患者症状中以阴道干涩、性欲减退、失眠梦多、潮热汗出、烦躁易怒多见。证型分布以肝肾阴虚兼气虚血瘀为主。推测肝肾阴虚兼气虚血瘀是卵巢功能围早衰期的重要病机。滋癸活血益经汤和温经活血片可能通过通过增强卵巢INHBmRNA的表达，从而提高INH-B的浓度，改善卵巢的储备功能。本研究首次提出了“卵巢功能围早衰期”的概念，首次采用自拟的分区研究方法以利于观察不同的FSH水平患者的不同疗效，并对POF的“治未病”思想作了初步的探讨，从反映卵巢储备功能的INH及其mRNA表达方面研究中药对围早衰期卵巢储备功能影响的相关机制。但今后尚须扩大临床样本观察，在足够的时间的基础上继续观察中医药的治疗作用及机理，从多基因及蛋白的网络调控方面进一步阐明中医药对卵巢储备功能的影响的机理，从而寻找更有效的治疗方法。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一章 文献研究

第一节 人类卵巢的生长、发育、成熟/闭锁及其调控

1 卵巢各阶段的生长、发育及闭锁

2 卵泡发育成熟的调控

第二节 西医对卵巢早衰研究概况

1 病因病理研究

2 卵巢储备功能监测

3 治疗

4 早期防治

第三节 中医学对卵巢功能早衰的研究进展

1 概述

2 病因病机

3 治疗

4 疗效机理研究

5 问题与展望

6 参考文献

第二章 临床研究

1 临床资料

1.1 病例来源

1.2 诊断标准

1.3 纳入标准

1.4 排除标准

1.5 试剂与主要仪器

2 治疗方法

3 指标检测

3.1 症状评分量表

3.2 治疗前后血清FSH、LH、E2水平测定

3.3 治疗前后血清TNF-α测定

3.4 血清IL-2测定

3.5 彩色多普勒超声观察指标

3.6 临床疗效观察

4 统计学分析

5 结果

5.1 用药前——卵巢功能围早衰期患者临床特点研究

5.2 用药后——治疗卵巢围早衰期患者的临床疗效观察

6 讨论

6.1 卵巢功能围早衰患者年龄、手术史、症状、证型特点探讨

6.2 卵巢功能围早衰患者TNF-α、IL-2的特点分析

6.3 卵巢功能围早衰患者内分泌与彩超指标相关性分析

6.4 立法依据和滋癸活血益经汤的方义

6.5 临床疗效分析

6.6 中医“治未病”思想在卵巢功能围早衰期的应用

7 参考文献

第三章 实验研究

第一节 滋癸活血益经汤对自身免疫性卵巢功能衰退小鼠血清INH-B水平影响的研究

1. 材料与方法

2. 观测指标

3 指标检测步骤

4 统计学方法

5 结果

6 讨论

第二节 滋癸活血益经汤对自身免疫性卵巢衰退小鼠血清INH-BmRNA的影响研究

1 材料与方法

2 统计方法

3 实验结果

4 讨论

5 参考文献

第四章 结语

附录

致谢