藿胆丸治疗鼻炎的药效物质基础研究

摘要

中药药效物质基础研究是开发有效成分明确、疗效确切、质量稳定可控的新一代中成药基础，是中药实现现代化的关键。中药物质基础研究的方法有很多，本课题采用分离重组思路对藿胆丸物质基础进行研究。根据藿胆丸组方中广藿香叶和猪胆粉化学组成、组方特点，合理采用现代工业技术，获取广藿香叶和猪胆粉中多种化学组分，以传统丸剂为参照，进行抗炎抗过敏化学组分分析跟踪，探明藿胆丸抗炎抗过敏药性成分为广藿香油和猪去氧胆酸；以广藿香油和猪去氧胆酸为组方成分，进行配伍和剂量的优化研究，为研发新一代中药新药奠定前期研究基础。
　　藿胆丸由广藿香叶和猪胆粉两味组成。藿胆丸源于清代《医宗金鉴》，是治疗慢性鼻炎、慢性鼻窦炎的名优中成药，具有芳香化浊，清热通窍的功效，临床主要用于治疗湿浊内蕴、胆经郁火所致的鼻塞、流清涕、前额头痛等症，已有二百余年的临床应用历史。藿胆丸疗效确切，但产品粗糙，存在生产工艺陈旧、剂型落后、服用量大等不足。本课题开展了如下研究：
　　1、藿胆丸中广藿香叶有效部位筛选
　　以抗炎和抗过敏药效试验筛选广藿香叶有效部位，并以成药藿胆丸为对照，结果表明，广藿香叶水溶性部位和不含挥发油的脂溶性部位虽有抗炎作用，但作用强度明显低于挥发油部位、广藿香叶、藿胆丸成药；广藿香叶水溶性部位和不含挥发油的脂溶性部位不具有抗过敏作用，而挥发油部位与广藿香叶、藿胆丸具有抗过敏作用。广藿香叶挥发油同时具有抗炎、抗过敏作用，其作用强度接近广藿香叶、藿胆丸成药，因此可确定藿胆丸中广藿香叶有效部位主要是广藿香挥发油。
　　比较超临界二氧化碳萃取（以下用SFE-CO2表示）和水蒸汽蒸馏的方法提取广藿香叶挥发油。结果表明，采用水蒸汽蒸馏，只能得芳香水，甚难得到挥发油。故本课题采用SFE-CO2萃取技术提取广藿香叶挥发油并确定其提取工艺：广藿香叶粉碎成粗粉，SFE-CO2提取，提取参数为萃取温度53℃，萃取压力13MPa，解析压力5.5MPa，解析温度63℃，二氧化碳(CO2)流量为400L/h，萃取时间为2.0小时，得广藿香叶挥发油。
　　采用SFE-CO2萃取所得广藿香叶挥发油，与市售广藿香油比较，两者质量一致，均符合2005年版中国药典规定。
　　2、广藿香油对藿胆丸药效学的影响
　　用广藿香油替代藿胆丸中的广藿香叶药材所得的样品称为精制藿胆方，即精制藿胆方的组成为广藿香油和猪胆粉。比较精制藿胆方、藿胆丸、广藿香油、猪胆粉的药效学，结果表明：
　　(1)精制藿胆方、广藿香油、猪胆粉与藿胆丸均具有抗炎作用。抗炎指标有醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，大鼠棉球肉芽肿等四种急性和亚急性炎症模型。精制藿胆方对大鼠角叉菜胶所致足趾肿胀、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀等急性炎症模型、大鼠棉球肉芽肿的亚急性炎症模型的抑制作用强度与藿胆丸相当，对抑制醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高作用优于藿胆丸。广藿香油、猪胆粉两者配伍后协同增效作用明显。提示用广藿香油替代藿胆丸中的广藿香叶，可以保持藿胆方的抗炎作用。
　　(2)精制藿胆方、广藿香油、猪胆粉与藿胆丸原方均具有抗过敏作用。抗过敏指标有卵蛋白致敏豚鼠离体回肠肌的过敏性收缩反应，同种大鼠被动皮肤过敏反应（PCA），2，4－二硝基氯苯所致小鼠耳廓皮肤迟发型超敏反应等过敏反应模型。精制藿胆方对卵蛋白致敏豚鼠离体回肠肌的过敏性收缩反应、同种大鼠被动皮肤过敏反应（PCA）的抑制作用优于藿胆丸；对2，4－二硝基氯苯所致小鼠耳廓皮肤迟发型超敏反应的抑制作用强度相当于藿胆丸。广藿香油、猪胆粉两者配伍后协同增效作用明显。提示用广藿香油替代藿胆丸中的广藿香叶，可以保持藿胆方的抗过敏作用。
　　(3)精制藿胆方具有体内外抗菌作用。精制藿胆方体外抗菌试验对所试菌种（金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、白喉棒状杆菌、大肠埃希氏菌、绿脓假单胞菌及白色念珠菌）均有不同程度的抗菌作用；对感染肺炎双球菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌的小鼠，均具有显著的降低死亡率的作用。提示用广藿香油替代藿胆丸中的广藿香叶，可以保持藿胆方的体内外抗菌作用。
　　(4)精制藿胆方、广藿香油、猪胆粉与藿胆丸均具有增强免疫作用。增强免疫作用指标有小鼠网状内皮系统碳粒廓清吞噬作用的模型。精制藿胆方、广藿香叶挥发油、猪胆粉均对小鼠网状内皮系统碳粒廓清的吞噬作用具有显著增强作用；精制藿胆方增强免疫作用强度与藿胆丸相当。提示用广藿香油替代藿胆丸中的广藿香叶，可以保持藿胆方的增强免疫作用。
　　研究结果表明，由广藿香油和猪胆粉组成的精制藿胆方具有抗炎、抗过敏、抗菌、增强免疫作用；广藿香油与猪胆粉两者配伍应用，在抗炎、抗过敏药效中，具有显著的协同增效作用；在抗炎、抗过敏、抗菌、增强免疫各药效指标中，精制藿胆方相当于甚至优于藿胆丸。结果提示，藿胆丸中的广藿香叶以广藿香油替代，可保持原藿胆丸的药效。
　　3、猪胆粉化学成分对肝功和血液生化指标的影响
　　由广藿香油和猪胆粉组成的精制藿胆方中，仍以猪胆粉直接入药，从而造成成型困难、气味难闻、卫生学难过关、质量难监控，同时由于猪胆粉含一定量的胆固醇，长期服用可能会引起血中胆固醇偏高等缺陷，迫切需要利用现代科学技术寻找出与其药效等同的有效部位或有效成分取代。
　　猪去氧胆酸是猪胆粉的主要有效成分，具有化学成分单一，质量稳定可控，同时不含胆固醇、杂质少、易成型等优势。现代药理研究发现，胆酸类成分是猪胆粉多方面药理作用的有效成分，尤其是在抗炎、抗过敏、抗菌及增强免疫方面，胆酸类成分的作用表现更为突出。而猪胆粉中的胆酸类成分主要含猪去氧胆酸，为猪去氧胆酸替代藿胆丸中的猪胆粉提供了理论依据。
　　用广藿香油和猪去氧胆酸组成藿胆有效成方，即藿胆有效成方的组成为广藿香油和猪去氧胆酸。比较精制藿胆方和藿胆有效成方对血中胆固醇及肝功能损害的影响。结果表明，药后90天，精制藿胆方的血中胆固醇、ALP、AST水平均高于空白对照组；精制藿胆方ALT的水平与空白组相当；停药14天，精制藿胆方血中胆固醇、ALP、AST、ALT水平均恢复正常；藿胆有效成方给药后90天血及停药14天血中胆固醇、ALP、AST、ALT水平均与空白对照组相当。实验结果提示，精制藿胆方长期用药会导致血中胆固醇及部分转氨酶偏高，藿胆有效成方则可避免该结果。猪去氧胆酸替代猪胆粉应用于藿胆丸中，可以避免对血中胆固醇及肝功能损害的影响，使其安全性得到更好的保障。
　　4、猪去氧胆酸对藿胆丸药效学的影响
　　藿胆有效成方能够避免对血中胆固醇及肝功能损害的影响，是否能保持藿胆丸的药效尚需实验证实。以抗炎、抗过敏、抗菌及免疫功能试验等指标，来评价猪去氧胆酸的替代是否可行。结果表明：
　　(1)藿胆有效组分方、猪去氧胆酸、广藿香油、精制藿胆方、猪胆粉及藿胆丸原方均对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀、大鼠棉球肉芽肿均有明显抑制作用。藿胆有效组分方对小鼠腹腔毛细血管通透性增高、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀急性炎症模型的抑制作用与藿胆丸原方、精制藿胆方相当。藿胆有效组分方对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀、大鼠棉球肉芽肿的抑制作用略优于藿胆丸原方及精制藿胆方。猪去氧胆酸对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，角叉菜胶致大鼠足趾肿胀、大鼠棉球肉芽肿的抑制作用与猪胆粉相当。猪去氧胆酸、广藿香油单独应用均有较好的抗炎作用，且两药配伍有协同增效的抗炎作用。实验结果提示，用猪去氧胆酸替代藿胆丸中的猪胆粉、可以保持藿胆方的抗炎作用。
　　(2)藿胆有效组分方、猪去氧胆酸、广藿香油、精制藿胆方、猪胆粉及藿胆丸原方均对卵蛋白致敏豚鼠离体回肠肌的过敏性收缩反应，具有快速抑制作用；对同种大鼠被动皮肤过敏反应（PCA）具有明显的抑制作用；对2，4－二硝基氯苯所致小鼠耳廓皮肤迟发型超敏反应有明显的抑制作用。藿胆有效组分方对卵蛋白致敏豚鼠离体回肠肌的过敏性收缩反应，对同种大鼠被动皮肤过敏反应（PCA），对2，4－二硝基氯苯所致小鼠耳廓皮肤迟发型超敏反应的抑制作用强度与精制藿胆方、藿胆丸原方相当。猪去氧胆酸对卵蛋白致敏豚鼠离体回肠肌的过敏性收缩反应，对同种大鼠被动皮肤过敏反应（PCA），对2，4－二硝基氯苯所致小鼠耳廓皮肤迟发型超敏反应的抑制作用强度与猪胆粉相当。猪去氧胆酸、广藿香油单独应用均有较好的抗过敏作用，且两药配伍有协同增效的抗过敏作用。实验结果提示，用猪去氧胆酸替代藿胆丸中的猪胆粉、可以保持藿胆方的抗过敏作用。
　　(3)藿胆有效组分方、猪去氧胆酸、广藿香油、精制藿胆方、猪胆粉及藿胆丸原方均能显著增强小鼠网状内皮系统碳粒廓清的吞噬作用，藿胆有效组分方对小鼠网状内皮系统碳粒廓清的吞噬功能的作用强度与藿胆丸原方、精制藿胆方相当。猪去氧胆酸对小鼠网状内皮系统碳粒廓清的吞噬功能的作用强度与猪胆粉相当。猪去氧胆酸、广藿香油单独应用均有较好的增强免疫功能的作用，且两药配伍有协同增效的增强免疫功能的作用。实验结果提示，用猪去氧胆酸替代藿胆丸中的猪胆粉、可以保持藿胆方的增强免疫功能的作用。
　　(4)藿胆有效组分方、精制藿胆方体外抗菌试验对所试菌种（金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎链球菌、卡他球菌、白喉棒状杆菌、大肠埃希氏菌、绿脓假单胞菌及白色念珠菌）的MIC，藿胆有效组分方介于9.8×10-5g/mL～2.0×10-1g/mL之间，精制藿胆方介于6.2×10-3g/mL～2.0×10-1g/mL之间，提示藿胆有效组分方体外抗菌作用强度比精制藿胆方强。藿胆有效组分方、精制藿胆方对感染肺炎双球菌混悬液、乙型溶血性链球菌混悬液、金黄色葡萄球菌混悬液的小鼠的死亡率有不同程度的抑制作用，藿胆有效组分方对感染肺炎双球菌混悬液、乙型溶血性链球菌混悬液、金黄色葡萄球菌混悬液的小鼠的死亡率的抑制作用明显优于精制藿胆方。提示猪去氧胆酸替代藿胆丸中的猪胆粉，更有利于其抗菌作用的发挥。
　　通过对藿胆丸拆方研究广藿香叶和猪胆粉的有效部位或有效成分，并与藿胆丸原方进行比较，明确了藿胆丸原方产生临床疗效的有效部位是由广藿香油和猪去氧胆酸，且二者之间具有协同增效的作用。采用藿胆丸有效成分组方不但可以避免藿胆丸原方的不良反应，而且从根本上克服传统藿胆丸剂量大、成型难，成品质量波幅大等技术问题，提高了藿胆丸的技术含量，为产品质量达到“安全、有效、稳定、可控”提供技术支撑。
　　本研究明确了藿胆丸治疗鼻炎的物质基础，用广藿香油和猪去氧胆酸组成的处方，具有药效作用物质明确，能够达到现代化中成药的雏形，为藿胆丸的产品升级换代奠定理论基础，提供了科学的依据。本研究方法可作为阐明中药复方物质基础提供一种科学的研究思路和方法。

目录

声明

引言

第一部分 文献研究

第一节 广藿香研究基础

第二节 猪胆粉的文献研究

第三节 藿胆丸的文献研究

第四节 分离重组技术探索藿胆丸治疗鼻炎的物质基础思路

第二部分 实验研究

第一章 藿胆丸中广藿香治疗鼻炎有效部位的筛选

第二章 广藿香油对藿胆丸药效学的影响

第三章 猪胆粉中的化学成分对肝功和血液生化指标的影响

第四章 猪去氧胆酸对藿胆丸药效学的影响

第三部分 结论与展望

一、 结论

二、展望

第四部分 中成药现代化探讨

一、现代药物的基本要求

二、工业化的中成药

三、现代化的中成药

参考文献

附录一 博士研究生在读期间发表的论文

附录二 博士研究生在读期间参与的科研课题

致谢