补肾益智方体内移行成分-蛇床子素的含量测定及药动学研究

摘要

阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)是老年人脑功能失调的一种表现，是以获得性智力衰退和行为人格变化为特征的一种病症。临床典型症状有记忆力丧失、抽象思维、定向力的障碍，同时伴有行为人格和社会活动能力的减退。国外流行病学调查表明，65岁以上人群中痴呆患病率为5％-7％，其中50％为AD。我国是目前世界上社会老龄化速度最快的国家之一，随着老龄人口的逐年增加，AD必将成为一个严重的社会问题和经济问题。现今，国内外治疗 AD的西药大多数处于临床实验中，且长期服用这类西药易引起严重的毒副反应，损害肝肾等器官。因此，从中医药方面探寻有效途径已成为国内研究的主要趋势。中医药防治 AD经历了由复方到单味药，再到有效单体的探索过程，已发现一些中草药及其有效成分具有极好的治疗作用，并且具有毒副作用小的优点。本文就对老年性痴呆中医临床有关的治疗方法进行探寻。
　　补肾益智方是以广州中医药大学赖世隆教授为首的科研小组针对老年性痴呆的主要病理机制、总结长期临床经验并结合现代药理学研究成果设计而成，由蛇床子、枸杞子、人参、制首乌、冰片等中药组成。具有填精补髓,益气养血,活血通络,开窍的功效，在既往的研究中已发现该方对AD有一定的疗效。
　　中药药代动力学是借助于动力学原理，研究中药活性成分、组分、中药单方、复方在体内吸收、分布、代谢、排泄的动态变化规律及体内时量-时效关系并用数学函数加以定量描述的一门边缘学科P[1]P。血药浓度法作为经典的药动学研究方法，是通过一定的分析手段，测定给药后生物样本（血液、尿液等）在不同时刻的药物浓度，并将浓度-时间数据经过数学模型拟定得到药动学参数，结合药物的生物活性，对药物体内过程进行评价，以此为根据进行药物初步筛选、制定给药方案。对于药物吸收、分布、代谢和消除的细致研究，也可提供药物作用机制，并对筛选更安全、更有效及更经济的新药提供思路和实力。
　　研究目的：
　　本课题从中药药代动力学入手，建立测定兔体内蛇床子素的HPLC-UV法，研究补肾益智方中君药蛇床子的主要成分蛇床子素在血清中的药物含量，计算给药后的药动学参数，并将补肾益智方与蛇床子水煎剂比较，测定其灌胃后脑脊液中的蛇床子素的含量，判断复方中有效成分是否能通过血脑屏障（BBB），是否复方灌胃后脑脊液中的药物含量高于单味药水煎剂中的药物含量。
　　研究方法：
　　以新西兰兔为研究对象，利用其空白血清，分别从方法的专属性、最低检测浓度、标准曲线、精密度和方法回收率试验、提取回收率试验及稳定性几个方面综合评价，建立测定兔血清中蛇床子素的HPLC-UV法，测定灌胃补肾益智方后血清中蛇床子素的药物含量，通过 Pksolution2.0药动学软件绘制药-时曲线并计算药动学参数。测定灌服补肾益智方和蛇床子水煎剂后脑脊液中蛇床子素的药物含量，同时进行组间比较。数据结果以x2s表示，用SPSS13.0统计软件进行统计分析。
　　研究结果：
　　1.测定兔血清中蛇床子素的HPLC-UV法的建立
　　本实验采用乙腈沉淀蛋白后氮气流吹干浓缩法进行生物样品的预处理，建立了以对羟基苯甲酸为内标的反相高效液相色谱分离-紫外光谱检测蛇床子素体内分析方法，测定兔血清中蛇床子素浓度的方法.其检测范围、精密度、回收率和稳定性符合生物样品分析及药物动力学研究的要求.血清中蛇床子素浓度的线性范围为0.052-3.333μg／mL,定量下限为0.013μg／mL.
　　2.兔灌胃后血药浓度及药动学参数
　　药动学研究结果显示，兔灌胃给予0.18g/kg补肾益智方后蛇床子素的药物动力学行为可用二房室模型描述。蛇床子素的药物峰浓度为Cmax=2.1（ng/ml）；达峰时间Tmax=30（min）；吸收相半衰期tR1/2kaR=21.103（min），分布相半衰期tR1/2（α）R=19.985（min），消除相半衰期tR1/2（?）R=693（min），说明蛇床子素的吸收较快，分布也较快，消除较缓慢。曲线下面积 AUCR0→∞R=439.2（min×μg／mL）
　　3.测定兔脑脊液中蛇床子素的HPLC-UV法的建立
　　本实验建立了一种准确、可靠、稳定、可重复的HPLC-UV法,测定兔脑脊液中蛇床子素浓度的方法.对药物动力学研究至关重要.本实验通过对色谱条件、内标物和萃取剂的筛选所建立的高效液相色谱法,其检测范围、精密度、回收率和稳定性符合生物样品分析及药物动力学研究的要求.脑脊液中蛇床子素浓度的线性范围为0.026-1.667μg／mL,定量下限为0.007μg／mL.
　　4.测定兔灌胃复方及单味药物后脑脊液浓度
　　补肾益智方组与蛇床子水煎剂组比较，两组差异有统计学意义(P<0.05)，灌服补肾益智方组脑脊液中蛇床子素含量较灌服蛇床子水煎剂组脑脊液中蛇床子素含量明显高（P<0.05）。
　　综上所述，补肾益智方灌胃后其主要活性成分-蛇床子素在新西兰兔体内吸收较快，分布也较快，且其能透过血脑屏障进入脑脊液，复方组中蛇床子素在脑脊液中药物含量大于单药组，考虑其原因可能与复方中冰片开放血脑屏障促进药物吸收有关。

目录

声明

引言

第一部分 文献综述

第一节 阿尔茨海默病的研究近展

第二节 中医药对阿茨海默病的认识以及研究进展

第三节 药物代谢动力学研究概况

第四节 蛇床子的研究进展

第五节 蛇床子素的研究概况

研究设想

第二部分 实验方法与结果

第一节 测定兔血清中蛇床子素的HPLC-UV法的建立

第二节 补肾益智方中蛇床子素在兔体内的药动学研究

第三节 测定兔脑脊液中蛇床子素的HPLC-UV法的建立

第四节 补肾益智方及蛇床子在兔脑脊液中蛇床子素含量测定

第三部分 讨论

1.1 色谱条件的选择

1.2 检测波长的选择

1.3 内标物的选择

1.4 血清及脑脊液样品预处理

1.5 蛇床子素在兔体内的药物动力学特点

1.6 关于含药脑脊液的制备方法

1.7 补肾益智方中蛇床子素通过血脑屏障的研究

结论与展望

1 结论

2 问题与展望

参考文献

附录

研究生在学期间发表论文情况

致谢