健脾除痰法在非小细胞肺癌(NSCLC)与顺铂联合增效减毒的机理研究

摘要

研究背景：
　　肺癌是目前全世界最常见的恶性肿瘤，其中80％是非小细胞肺癌，其发病率和死亡率在城市列第一位，其中老年晚期肺癌患者约占2/3。铂类（顺铂等）被公认为治疗肺癌的一线药物，但顺铂作为一种细胞毒物，临床用药产生的副作用较多且严重。且老年晚期患者往往不能耐受铂类化疗。健脾除痰法以扶正治疗为主，且在临床中应用广泛，探讨其对铂类药物的增效减毒疗效及机制，可拓宽铂类药物的临床应用范围，具有重要的临床意义。
　　研究目的：
　　以“健脾除痰方”为工具药，以小鼠Lewis肺癌细胞LL/2为研究对象，从细胞实验和动物实验两水平，观察中药“健脾除痰方”單独治疗，西药顺铂(Cisplatin)單独治疗，及顺铂与中药“健脾除痰方”联合治疗抗肿瘤的疗效，包括抑瘤率，小鼠存活率等，以明确中药“健脾除痰方”的抗癌疗效及与顺铂(Cisplatin)联合使用时之增效减毒作用，并初步探讨其作用机制。为临床上制定中西医联合治疗非小细胞肺癌(NSCLC)合理规范的治疗方案提供参考依据。
　　研究方法：
　　细胞实验：以MTT法确定最适当的LL/2细胞数，后分别测定不同浓度的TCM健脾除痰方及顺铂(Cisplatin)对LL/2细胞活力的影响。
　　动物实验：首先做顺铂(Cisplatin)剂量的确定实验，确定最佳的顺铂使用剂量后，再做中药健脾除痰方和顺铂的综合实验。前者以12只LL/2荷瘤C57BL/6J小鼠为对象,分为对照组,5mg,6mg,7mg每组3只,用药后每3-4天测定小鼠肿瘤体积第15天处死。后者以24只LL/2荷瘤C57BL/6J小鼠为对象，分为对照组、TCM po组、Cisplatin ip组、TCM po+Cisplatin ip组、每组六只，用药后每一天测定小鼠的体重及肿瘤体积，21天后处死，取出心、肝、脾、肺、肾及肿瘤组织，称取瘤重，对各组织做成切片后行HE染色观察变化。
　　研究结果：
　　细胞实验：LL/2细胞做MTT实验时最佳的细胞数为3000/孔（96孔板）。小于200μ g/ml的健脾除痰方对LL/2的细胞活力无影响；大于10μ M的顺铂可明显抑制LL/2细胞增殖，促进肿瘤细胞调亡。
　　动物实验：顺铂的最佳使用剂量为5 mg/kg。 TCM与顺铂的联合实验结果如下：
　　1.一般情况：瘤细胞接种后5天，于小鼠右后腿外侧接种部位可触及半颗米粒大小的瘤结节，之后逐渐长大。单纯化疗组及健脾除痰方各治疗组小鼠肿瘤生长的势头均不及荷瘤对照组。单纯化疗组及各治疗组小鼠在腹腔注射顺铂后，状况明显不及荷瘤对照组。与对照组比较，其余各组小鼠体重的增长速度和增长幅度均小于对照组。
　　2.抑瘤作用：
　　瘤体体积：Control组(3757.64±2222.95)>TCM po组(2622.18±1567.18)> TCM po+Cisplatin ip组(2170.40±871.60)> Cisplatin ip组(1311.81±655.55)。
　　瘤重：Control组(3.4392±1.4857)> TCM po组(2.4205±1.3809)> TCM po+Cisplatin ip组(2.3716±0.9884)> Cisplatin ip组(1.4295±1.1208)。
　　抑瘤率： Cisplatin ip组(58.43%)>TCM po+Cisplatin ip组(31.04%)>TCM po组(29.62%)
　　3.生存率：26天生存率：TCM po+Cisplatin ip组(83.30%)>TCM po组(66.67%)>Cisplatin ip组(50.00%)= Control组(50.00%)。
　　4.病理切片观察：
　　在显微镜下观察各组的心、肝、脾、肺、肾及肿瘤的切片，祗发现脾脏及肿瘤变化明显.其他器官变化不明显。
　　a)脾脏切片检查:脾脏中T cell≥ B cell rate： TCM po组75%> TCM po+Cisplatin ip组60%> Control组33.3%> Cisplatin ip组0%。
　　b)肿瘤坏死率(Tumor Necrosis rate): Cisplatin ip组100%> TCM po+Cisplatin ip组80%> TCM po组25%> Control组0%。
　　研究结论：
　　健脾除痰方对LL/2肺癌具有抑制作用，且能提高存活率，其机制可能与促进T细胞增长，提高机体免疫力相关。健脾除痰方与顺铂同时使用无提高顺铂抑瘤疗效的作用，但二者联合应用比两药单用能明显提高存活率，其机制可能与中药健脾除痰方可减轻顺铂抑制免疫功能的副作用有关。

目录

声明

引言

第1章 文献研究

1. 扶正疗法治疗肺癌的历代医家认识

2. 健脾除痰方的机理作用

3. 健脾除痰方成分的现代药理研究分析

第2章 实验研究

1. 体外细胞实验(in-vitro)

1.1 Trypan Blue染色及LL/2细胞计数

1.2 LL/2细胞种殖

1.3 MTT检测 (+LL/2)

1.4 MTT检测：

1.5 MTT检测 (LL/2细胞用顺铂Cisplatin处理)

1.6 体外细胞实验(in-vitro)总结论

2. 动物体内实验(in-Vivo)

2.1 顺铂 (Cisplatin) 剂量实验

2.2 中药健脾除痰方与顺铂(Cisplatin)综合实验

第3章 讨 论

1. 研究结果分析

1.1 健脾除痰方的抑瘤作用分析

1.2 健脾除痰方对生存率的影响分析

1.3 健脾除痰方对顺铂(Cisplatin)增效减毒作用的分析：

2. 研究结论及创新之处

3. 问题及展望

结语

参考文献

附录 缩略词表

致谢